沈萍微生物学第七章案例.ppt

本节重点 病毒的特征与定义 病毒的噬菌斑法测定 病毒的模式结构 病毒的三种基本对称形式第一节概 述 一.病毒的发现 二.病毒的特点与定义 特征： 1.超显微，非细胞生物2.DNA或RNA +蛋白质3.专性细胞内寄生4.以核酸复制，核蛋白装配增殖5.离体条件-大分子存在（保持侵染活力）6.对干扰素敏感 定义：病毒是一类由核酸和蛋白质等少数几种成分组成的超显微“非细胞生物”，其本质是一种只含DNA或RNA的遗传因子，它们能以感染态和非感染态两种状态存在。在宿主体内具生命特征，在离体条件下以大分子状态存在，保持侵染性－－－周德庆 1999年报告了4000余种病毒真病毒 至少含核酸和蛋白质 非细胞生物类病毒 侵染性RNA亚病毒 卫星病毒 非侵染性RNA朊病毒 蛋白质 二.病毒的宿主范围 原核生物-- 噬菌体 真菌---真菌病毒植物------植物病毒动物------动物病毒 三.病毒的分类dsDNA，ssDNA，dsRNA，+ssRNA,-ssRNA， 逆转录DNA或RNA，裸露的RNA病毒，亚病毒 第二节病毒学研究的基本方法 一. 病毒的分离和纯化 1.病毒的分离 （1）标本的采集与处理 加抗生素除菌 离心、过滤 破碎细胞－－低温保存、运输； （2）标本接种与感染表现 接种细菌－－噬菌斑噬菌斑的概念 接种单层细胞－－空斑或蚀斑 接种植物叶片－－坏死斑或枯斑 噬菌斑噬菌体标本经过适当稀释再接种细菌平板，经过一定时间培养，在细菌菌苔上可形成圆形局部透明区域，为噬菌斑。 直径1-3mm左右------负菌落 噬菌体---原核生物的病毒1987年电镜观察过2850种噬菌体,其中2700种有尾。 包括蝌蚪状（dsDNA）、球状（ssDNA、ssRNA ）、丝状（ssDNA）。 温和噬菌体 烈性噬菌体 空斑和病斑 以单层动物细胞受动物病毒侵染产生的透明斑为空斑。 肿瘤病毒感染单层动物细胞，产生细胞剧增。称为病斑枯斑 植物病毒接种敏感植物叶片产生的坏死斑为枯斑 2. 病毒的纯化 （1）按照纯化蛋白质方法---盐析，等电点沉淀有机溶剂沉淀、凝胶层析、离子交换等； （2）根据颗粒的大小，采用超速离心法 10,000~100,000g的离心场中1～2小时沉降， （2）终点法 半数效应剂量 半数致死剂量LD50 半数感染剂量ID50 三. 病毒的鉴定 1.根据病毒感染的宿主范围及感染表现的鉴定 2.病毒的理化性质鉴定 3.血细胞凝集性质鉴定 4.病毒的血清学鉴定 5.病毒鉴定的分子生物学方法 第三节毒粒性质 一.毒粒的形态结构 1．病毒的大小：用n m 表示，大小差异较大 小的病毒，植物的双粒病毒直径18--20nm口蹄疫病毒21nm菜豆畸矮病毒9--11nm 大的病毒，痘病毒大小300～450nm×170～260nm 最长病毒, 柑桔衰退病毒2000nm 最细病毒,　大肠杆菌f1噬菌体5×800nm （1）螺旋对称壳体 　　烟草花叶病毒（TMV） 　　病毒表面的衣壳粒有规律地螺旋排列，形成一中空柱，核酸（ssRNA）位于衣壳内侧螺旋状沟内。 TMV给烟草带来极大的危害 （２）二十面体对称壳体 　　腺病毒 　　腺病毒252个衣壳粒，排成二十面体结构，核酸位于中心 多瘤病毒72个衣壳粒； 脊髓灰质炎病毒32个衣壳粒。 （3）双对称壳体 　　T4噬菌体 　蝌蚪形：头部、颈部、尾部三部分头部为20面体结构尾部为螺旋对称结构 二. 毒粒的化学组成 1?、 病毒的核酸： 　　核酸是病毒的遗传物质， 　　一种病毒只含有一种核酸 。 类型：+ssDNA, -ssDNA, dsDNA, dsRNA-ssRNA, +ssRNA 动物病毒-----有些是DNA，有些是RNA(ds ss) 植物病毒--------大部分是RNA(ds ss) 噬菌体----------大部分是DNA（ds ss） 藻类病毒-------双链DNA 结构：逆转病毒5-cap, 3-polyA, 分段 　　　基因组，黏性末端，循环排列，末端重复， 含量：1%--50% 流感V1%TMV5%T2噬菌体 50% 2.病毒蛋白质 功能 1.主要是构成病毒粒子的外壳，保护病毒核酸； 2.决定病毒感染的特异性，与宿主特异亲和； 3.具有抗原性，能刺激集体产生相应的抗体。 种类： 1.结构蛋白：有感染性的病毒所必需----------壳体蛋白，包膜蛋白 2.非结构蛋白：病毒复制所需的蛋白－－-----毒粒酶 一些简单病毒仅由一种或几种蛋白质构成， 一些复杂的可多达20余种。 ３．其他成分 病毒的脂类：存在于包膜中，来源于宿主细胞，50-60%为磷脂，余下为胆固醇，构成脂双层结构 病毒的糖类：糖蛋白