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血清中葡萄糖浓度的测定 问题： 血清中葡萄糖浓度测定的方法有很多，在实验设计上，这些方法分别利用了葡萄糖的那些性质？ 如何排除血清内其他物质的干扰，使所测血清葡萄糖浓度更准确？ 葡萄糖氧化酶法测血糖的原理是什么？本实验为何需要用到两种酶？与其他方法相比，本实验有哪些优缺点？ 知识窗 酶法分析是指用酶作为工具定量测定某种物质含量的分析方法。定量分析的目标可以是酶的底物，辅酶，也可以是酶的激活剂或抑制剂。 酶法分析的主要方法： 单酶反应定量法和偶联酶反应定量法 单酶反应定量法：指用一种酶为工具酶定量测定某种物质的方法。 偶联酶反应定量法：当单酶反应底物或产物反应底物或产物噢物理化学手段无法区分时，还可以借助另一种酶作为指示酶，通过欧联反应进行定量分析。 实验目的： 掌握酶法测定血清葡萄糖浓度的原理。 掌握血糖变化的临床生理意义 实验原理： 血清葡萄糖是用以过氧化物酶作指示酶的偶联酶反应定量法测定的。 葡萄糖氧化酶利用氧将葡萄糖氧化成葡萄糖酸，同时释放出过氧化氢。过氧化物酶催化过氧化氢氧化色素原，并使色素原氧化成色素，即Trinder反应。 葡萄糖+O2+H2O GOD葡萄糖酸+2H2O2 操作步骤：取三只试管按表操作 计算公式： A测定 血清葡萄糖浓度= ×5mmol／L A标准 参考值： 空腹血清葡萄糖浓度:3.89～6.11mmol／L 注意事项： 葡萄糖氧化酶对β-D-葡萄糖高度特异，葡萄糖的完全氧化需要α型到β型的变旋反应。 此法可直接测定脑脊液葡萄糖的含量，但不能直接用于测定尿液葡萄糖含量。 因红细胞的酵解将导致测定结果偏低，建议测定样品以草酸钾-氟化钠为抗凝剂抑制葡萄糖酵解。 严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先之辈无蛋白血滤液，然后再进行测定。 临床意义： 生理性高血糖：摄入高糖食物，情绪紧张 病理性高血糖： ①糖尿病 ②内分泌腺功能障碍 ③颅内压增高 ④脱水引起高血糖 生理性低血糖：见于饥饿和剧烈运动 病理性低血糖：特发性功能性低血糖，依次是药源性，肝源性和胰岛素瘤等。 思考题： 标准葡萄糖储存液与应用液中都含有苯甲酸钠，苯甲酸钠起什么作用？ 列举几种血清葡萄糖定量测定的方法和原理。 本实验原理为酶促化学反应，为何未加终止剂终止酶的反应？ 本实验涉及显色反应，该反应与血清碱性磷酸酶活力测定中的显色反应有何异同？ 本实验在设计上存在缺陷，请指出。 Thank you！ * * 2H2O2+4-氨基安替比林+苯酚 POD 红色醌类化合物 3.00 3.00 3.00 酶-酚混合试剂（ml） —— —— 0.020 蒸馏水（ml） —— 0.020 —— 葡萄糖标准液（ml） 0.020 —— —— 血清（ml） 测定管 标准管 空白管 项目 混匀，置于37度水浴中，保温25min,在波长510nm处比色，以空白管调零，读取标准管及测定管的吸光度 *