PFGE原理及参数设置题库.pptVIP

PFGE分型技术和技术参数设置 金东 2010年6月 如果基因事件发生在凝胶之外的片段？ 质粒对图谱是否会产生影响？ 图谱中的条带数目相同但是位置上有差异？ * PFGE原理及相关参数 PFGE原理及相关参数 超过一定大小的线状双链DNA分子在琼脂糖凝胶中以相同速率迁移。大于该极限长度后DNA的迁移速度几乎与分子大小无关。当DNA分子的有效直径超过凝胶孔径时，卷曲的DNA分子在电场作用下会沿电场方向拉伸变形挤过筛孔，凝胶介质的分子筛效应不明显，此时DNA分子在电场中的迁移速度主要取决于电场强度。 有实验证明长度大于40KB的DNA分子不能在恒强水平琼脂糖凝胶电泳中分离。 PFGE原理及相关参数 脉冲场凝胶电泳可以分离长至50MB的DNA分子。其原理是DNA分子在交替变换方向的电场中做出反应的时间取决于它的大小。较小的分子重新定向较快，因而在凝胶中移动也快，于是不同大小的分子被成功分离。DNA分子在交替电场作用下的行为可以用分子的延展性和沿电场方向平行泳动前的重新定向解释。DNA分子以蠕行（reptation）方式在琼脂糖凝胶的连续孔洞中迁移。当电场变换方向时，DNA分子在新的方向泳动前必须再定向。所以，电场方向有规律地变换，DNA也必须有规律地改变泳动方向。分子越大重新定向需要的时间越长，于是在每个脉冲时间内可用于新方向泳动的时间越少，最终达到了分离的目的。 目前