2016分子生物学考试重点.docVIP

第一章 分子生物学的主要研究内容 DNA重组技术；结构分子生物学；基因表达与调控；基因组、功能基因组与生物信息学研究 分子生物学发展简史上的三大理论发现 进化论、细胞学说、基因学说 第二章 染色体包括哪两大部分。 DNA：约占30%，每条染色体含一个双链DNA分子。是遗传信息的载体，也就是所谓的遗传物质。(2)蛋白质：组蛋白(histone)：呈碱性，结构稳定；与DNA结合形成并维持染色质结构； 非组蛋白(nonhistone?proteins)：呈酸性，种类和含量不稳定；作用还不完全清楚，可能与基因表达的调控有关。 组蛋白的一般特性 1.进化上的极端保守性 2.无组织特异性 3.氨基酸分布的不对称性 4.组蛋白的修饰作用 5.富含赖氨酸和精氨酸 DNA一级结构（DNA分子中碱基的按摩尔含量计算） 一、DNA的一级结构 （1）DNA分子中核苷酸的排列顺序，DNA顺序（或序列） （2）DNA分子主要由dAMP、dGMP、dCMP和dTMP四种脱氧核糖核苷酸所组成 （3）基因的功能取决于DNA的一级结构 双螺旋结构模型的描述、维持DNA双螺旋结构稳定性的主要因素 1、双螺旋结构模型 DNA二级结构的最基本形式；两条DNA单链反向平行；右手双螺旋结构；碱基互补配对：A－T，C－G 碱基位于螺旋的内侧，磷酸和脱氧核糖基位于螺旋外侧，碱基环平面与螺旋轴垂直，糖基环平面与碱基环平面成90°角。 螺旋直径2nm，相邻碱基对平面间距0.34 nm， 螺旋周期包含10碱基对，螺距3.4nm。 小沟位于互补链之间；大沟位于相毗邻双股之间。 2、主要因素 碱基堆积力(疏水作用)、氢键、离子键、范德华引力 有关DNA的变性的概念、影响因素、变性后的性质改变、DNA的变性温度、核酸杂交 1、定义：在理化因素作用下，DNA双螺旋的两条互补链 松散而分开成为单链，从而导致DNA的理化性质及生物学性质发生改变的现象。 2、影响因素： 高温：加热 强酸强碱：极端的pH 有机溶剂：甲醇、乙醇、尿素及甲酰胺 3、变性后的性质改变 增色效应 旋光性下降 粘度降低 生物学功能丧失或改变 4、DNA的变性温度 加热DNA溶液，使其对260nm紫外光的吸收 度突然增加，达到其最大值一半时的温度，就是DNA的变性温度。 5、核酸分子杂交： 指具有互补序列的两条核酸单链在一定条件下按碱基配对原则形成双链的过程。 6、原核和真核生物基因组的特点 （1）原核生物基因组特点： 基因组很小，大多只有1条染色体，一个复制起点。 单倍体、基因重叠、结构简练、转录单元、基因多是连续的 真核生物基因组特点： 基因组大，含有多种序列组分 二倍体、转录产物为单顺反子、断裂基因、非编码区域(≥90%)多于编码区域、具有多复制起点，且每个复制子长度较小、存在大量的顺式作用元件、存在大量的DNA多态性、存在染色体结构和端粒结构 DNA复制的特点及所需要的物质 1、特点：半保留复制； 半不连续复制； 复制起始点、复制子、复制方向； 需要引物 2、需要的物质： A.底物：以四种脱氧核糖核酸为底物:即dATP,dGTP,dCTP,dTTP ? (dNMP)n+dNTP (dNMP)n+1+PPi B.模板：DNA复制是模板依赖性的，必须要以亲代DNA链作为模板。 亲代DNA的两股链解开后，可分别作为模板进行复制 C.DNA聚合酶 D.解链酶 E.引物酶 F.单链DNA结合蛋白 G.拓扑异构酶 H.DNA连接酶 关于线形DNA复制末端短缩问题的解决方式 1、原核生物线形DNA复制5’末端短缩问题的解决方式： 环化、连环分子、末端形成发夹、引入末端蛋白 真核生物线形DNA复制5’末端短缩问题的解决 a.端粒：染色体线性DNA分子末端，通常膨大成粒状； 共同的结构特征:富含TG、短重复序列、维持染色体稳定 b.端粒酶： RNA-蛋白质复合体、逆转录酶、延长末端DNA链 PCR反应的原理及影响因素 与细胞内DNA半保留复制类似。包括三个基本步骤：变性、退火、延伸 影响因素 DNA聚合酶、引物、模板、dNTPs、Mg离子浓度、PCR系统反应其他成分、扩增反应程序 控制DNA复制保真性的因素有哪些？ 遵守严格的碱基配对规律 DNA聚合酶在复制时对碱基的正确选择 DNA聚合酶本身具有校对作用 DNA合成起始时及冈崎片段合成开始时都有RNA引物 转座作用的遗传学效应 导致基因突变 改变基因组大小 促使基因组重排 染色体结构和基因表达的调控 第三章 大肠杆菌DNA依赖的RNA聚合酶亚基组成： 全 酶：α2ββ’σω ，465kD，