实验8 自动发酵罐的使用方法.pptVIP

实验八 自动发酵罐的操作方法 一、目的和要求 1. 了解实验室发酵罐的用途及其结构组成。 2. 了解实验室发酵罐的使用方法。 3. 掌握发酵过程中各参数的设定与测定方法。 二、发酵原理 在装有特定发酵培养基的发酵罐内，通过对温度、pH、 搅拌速度、溶解氧、通气量、发酵时间等条件的控制，可使 培养基中的主要成分（低物）在微生物产生菌的各种酶系作 用下，经EMP、HMP、TCA等途径，根据发酵条件的控制，生产 人类所需的产品为人们的日常生活、治疗疾病服务。 发酵代谢过程： 三、发酵材料、试剂、设备 1.BIOTECH-10JS实验室发酵罐（上海保兴生物设备工程有限公司）。 2.高压灭菌锅、蒸汽发生器、空压机、水箱等。 3.摇瓶机、721分光光度计、精密试纸、定糖、纸层析、产品测 定器材一套。 4.培养基：发酵培养基、一级种子培养基、斜面培养基， （祥见下述）。 5.发酵菌种：B9 T6-13。 四、方法步骤（按谷氨酸 B9、T6-13 发酵为例） （一）培养基 斜面培养基：葡萄糖 0.1%，蛋白胨 1%，牛肉膏 1%， 氯化钠 0.5%，琼脂 2%， 调节pH=7.0， 用自来水配制，0.75kg/cm2灭菌15分钟制成 斜面菌种，32oC±0.5oC，培养18小时待用。 种子培养基： 水解糖 3.0%，K2HPO4 0.1% ，尿素 0.6% MgSO4·7H2O 0.04%， C.S.L 0.5%， pH=7.0，用自来水配制定50ml/500ml三角烧瓶。 发酵培养基：水解糖 12%， KCl 0.05%， Na2HPO4 0.17%， MgSO4·7H2O 0.06%，C.S.L 0.6%，尿素 0.6% pH=7.0 用自来水配制定容7升。 重要提示： 在第一次操作此设备之前请仔细阅读本操作说明书； 设备必须可靠接地； 消毒以前准备工作（蒸汽、供水， pH电极零点、斜率标定、 DO电极零点标定）； 发酵开始前准备工作（设定为发酵条件，进行DO电极斜率标定、 pH 电极零点校正）； 发酵结束数据存盘； 关闭总电源前，请将控制器退回主菜单，然后按 Ctrl + F6 关闭控制程序，然后关电源。 设备运行结束，勿忘关闭自来水阀、空气源。 玻璃罐体工作压力不大于 0.1 Mp ，进罐空气压力应不大于 0.1 MP ! 每次消毒前必须移开夹套蒸汽平衡阀 V03 ，消毒后才可以复位。 消毒前取下搅拌电机，并用防水盖将搅拌器上口盖好，防止蒸汽冷凝水进入轴承。 （二）发酵前的准备及条件设置 １.菌种、一级种子的培养，罐体管道清洗，锅炉加水等。 ２.pH电极校正： 2.1 pH 电极标定： pH电极零点和斜率不能在发酵状态下标定，只能在进行灭菌以前进行，但在发酵过程中可以进行零电位补偿。 2.1.1 标定准备工作：按照缓冲液包装上的标准配制标准缓冲液，一般我们配制两种：如果发酵液偏酸性我们就配制6.56和4.00的缓冲液，如果偏碱性则配制6.56和 9.18的缓冲液。在控制器中进入标定画面，然后选择进入 pH 电极标定画面。在标定以前电极须浸泡于缓冲液中并已联机通电 30min 以上，并将标定画面中温度设为环境温度，电极插入缓冲液时，液落部位须完全浸没。 2.1.2 标定工作：我们根据发酵过程的 pH 值变化的范围分为两点标定法和一点标定法。 （1）两点标定法：根据发酵过程的 pH 值变化的范围偏酸还是偏碱，我们分两种情况： 偏酸性：如果发酵过程中 pH 值大部分在6.00以下变化，则用 6.86和4.00两点来标定。 ①零点标定：通电3Omin后，将电极从缓冲液中取出，用蒸馏水冲洗干净，拿吸水纸吸干，然后插入6.86的零点缓冲液中，并将零点的值设为6.86，待显示基本稳定不变后，根据控制器的操作步骤，确认pH零点“标定开始”；等到pH值稳定后确认pH零点“标定结束”。此时测量值显示变为输入的零点值。 ②斜率标定：将电极从6.86的零点缓冲液中取出，用蒸馏水冲洗干净，拿吸水纸吸干，然后插入