0324细菌转化实验课件.pptVIP

实验一 细菌质粒DNA的提取和纯化 菌体pcr 跟普通PCR原理是一样的，因为94度变形可以裂解细菌，释放出DNA，所以不用提质粒也可以PCR出来条带 一、实验目的 通过细菌质粒DNA的提取，掌握共价闭合环状DNA的提取方法。 二、实验原理 细菌中有两种DNA，即染色体DNA和质粒DNA。 质粒DNA的提取方法有三种：碱裂解法、煮沸法和去污剂（如Triton和SDS）裂解法。 碱裂解法比较剧烈，可破坏碱基配对，使宿主细胞DNA变性，共价闭合环状DNA由于空间缠绕，两条链不会彻底分开。当外界条件到达复性条件时，质粒DNA的双链又迅速恢复原状，而较大的线性染色体DNA难以复性。 三、实验菌株 含质粒载体pGEM-T的大肠杆菌（E. coli.） 四、实验用具和药品 实验用具 摇床、离心机、移液器及枪头、玻璃试管（15mL）及塞子、离心管（1.5mL）。 实验药品 五、实验步骤 方法：活化-扩增-离心-裂解-离心-抽提-沉淀-洗涤-溶解 （一）细菌繁殖 实验前2天晚上： 将冻存的菌株取出，划线接种于LB（amp）平板上， 置于37℃培养箱中，倒置培养至菌落长成。 实验前1天晚上： 从LB平板上挑取单个菌落，接种于6mlLB液体培养基（加入氨苄青霉素）中，37℃，过夜振荡（200r/min）培养。 （二）菌体收集 实验当天 ： 将过夜培养的菌体转入1.5mL离心