微生物的生长生长测定.pptVIP

第七章微生物的生长 生物个体物质有规律地、不可逆增加，导致个体体积扩大的生物学过程。 生长（growth）： 生物个体生长到一定阶段，通过特定方式产生新的生命个体，即引起生命个体数量增加的生物学过程。 繁殖（reproduction）： 生长是一个逐步发生的量变过程， 繁殖是一个产生新的生命个体的质变过程。 在高等生物里这两个过程可以明显分开， 但在低等特别是在单细胞的生物里，由于细胞小， 这两个过程是紧密联系又很难划分的过程。 生长和繁殖 群体生长 = 个体生长 + 个体繁殖 个体生长 → 个体繁殖 → 群体生长 在一定时间和条件下细胞数量的增加（微生物群体生长） 微生物生长: 在微生物学中提到的“生长”，一般均指群体生长，这一点与 研究大生物时有所不同。 微生物生长量测定 1. 测生长量直接法 2. 测生长量间接法 1. 测生长量直接法 测体积法：粗放型，在刻度离心管中测沉降量 称干重法：精确型，离心法和过滤法获得菌体细胞， 微生物的干重一般为其湿重的10％～20％ 测定多细胞及丝状真菌生长情况的有效方法 以E. coli为例，一般液体的培养物（culture）中，细胞浓度通常为2×109个／mL，100mL培养物约可得10～90mg干重的细胞； 高密度培养（high cell-density culture，HCDC）中，细胞产量最高记录可达到174g/L。 2. 测生长量间接法 （1）比浊法 用分光光度法对无色的微生物悬浮液进行测定，一般选用450～650nm波段。 实验测量时应控制在菌浓度与光密度成正比的线性范围内，否则不准确。 在一定波长下，测定菌悬液的光密度，以光密度（optical density, 即O.D.）表示菌量。 若要连续跟踪某一培养物的生长动态，可用带有侧臂的三角烧瓶作原位测定，即不必取样。 （2）生理指标法 样品中微生物数量多或生长旺盛，这些指标愈明显，因此可以借助特定的仪器如瓦勃氏呼吸仪、微量量热计等设备来测定相应的指标。 微生物的生理指标，如氮、碳、DNA、ATP等物质的含量，呼吸强度、耗氧量、酶活性、生物热等与其群体的规模成正相关。 常用于对微生物的快速鉴定与检测 一种特定的微生物，每一个细胞中的ATP浓度几乎是一个常数，所以测定这种微生物的ATP含量，即可知其细胞数。 已知细胞数的微生物样品 测定ATP含量 测定未知细胞数的 微生物样品的ATP含量 换算出每个细胞所含的ATP量 即可算出未知样中细胞数 ATP浓度的测定 E＋L＋AMP＋H2O 荧光素酶 E 还原型荧光素 LH2 E-LH2 ? AMP复合物 ATP ppi Mg2＋ ＋ ＋ ＋ ＋ 光 O2 生物发光仪 在这个反应系统中，酶、荧光素和O2都过量时，光的强度与ATP的量成正比。可用生物发光仪测定光照强度，从而换算出ATP的浓度。 生物发光仪现用于各种样品中细胞数的测定。Eg. 临床上测血液、尿液中的菌数；工业上发酵液中的菌数；环境污染状况的测定等。 二、计繁殖数 测定繁殖，一定要一一计算各个体的数目。 单细胞状态的细菌和酵母菌 放线菌和霉菌等丝状生长的微生物 计算其孢子数 计算各个体的数目 （一）计繁殖数直接法 1. 计数板直接计数法 指采用计数板（细菌计数板或血球计数板），在光学显微镜下直接观察微生物细胞并进行计数的方法。 （计算一定容积里样品中微生物的数量） 计繁殖数法 缺点： 不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察. 2. 染色后活菌计数法 采用特定的染色技术进行活菌染色，然后用光学显微镜计数的方法。可分别对活菌和死菌进行计数。 Eg. 美蓝 酵母 活细胞→无色 死细胞→蓝色 Eg. 细菌经丫啶橙染色后，在紫外光显微镜下可观察 活细胞→橙色荧光 死细胞→绿色荧光 3. 过滤计数法 当样品中菌数很低时，可以将一定体积的湖水、海水或饮用水等样品通过膜过滤器。然后将滤膜干燥、染色，并经处理使膜透明，再在显微镜下计算膜上（或一定面积中）的细菌数。 4.涂片染色法 应用：可同时计数不同微生物的菌数，适于土壤、 牛奶中细菌计数。 方法：用镜台测微尺计算出视野面积；取0.1ml菌 液涂于1cm2面积上，计数后代入公式： 每ml原菌液含菌数 =视野中平均菌数×(涂布面积/视野面积) ×100 ×稀释倍数