培养方法和细菌的生化反应.ppt

实验二、培养基的制作及培养方法和生化反应 微生物学教研室 目的要求 掌握细菌的分离方法及无菌操作技术。 熟悉细菌生长状况及代谢产物检查。 熟悉细菌培养方法 无菌技术 防止细菌进入人体或其他物品的操作技术称无菌操作 细菌检验的操作需在无菌室或超净工作台内进行。 无菌室、超净工作台使用前后需进行消毒。 细菌检验使用的物品使用前后需严格灭菌 细菌的培养 培养基的概念 培养基是人工配制的微生物生活环境，其主要用途是繁殖及分离接种微生物，传代或保存微生物，鉴别微生物的类属，研究微生物的生理及生化特性，制造菌苗、疫苗或其他微生物制剂等。其营养成分包括微生物生长所需要的水分、碳源、氮源、无机盐及某些生长因子（维生素、辅酶）等。 培养基的分类 培养基的配制（示教） 调配 矫正pH（7.0-7.6） 分装 灭菌（121.3℃，15-20分钟） 鉴定是否有菌 放入冰箱冷藏备用 因高压之后pH值会下降0.1左右，所以矫正pH时应比所需的pH高 鉴定是否有菌可将培养基置于37 ℃培养24-48小时，然后观察 常用培养基及用途 固体培养基：液体培养基加入1-2%的琼脂即可，用于分离鉴定细菌。 半固体培养基：液体培养基中加入0.5%琼脂即可，用于检测动力及保存菌种。 液体培养基：营养肉汤，主要用于增菌 血液营养固体培养基：在50℃固体培养基加入10%的绵羊血液即为血平板（营养培养基）用于营养要求高的细菌。 巧克力平板：在80 ℃固体培养基中加入10%的绵羊血液即为巧克力平板，用于奈瑟菌的培养。 细菌的接种方法 液体、固体、半固体、斜面培养基接种法 平板划线接种法 分区划线法 划线接种要点 划线时接种环与平皿约成30-40度角，轻轻接触，以腕力在琼脂表面轻快滑动，不能划破琼脂。 第一次划线应占平皿面积的1/10~1/5，以后每次划线约占面积的1/4—1/5。 划线为连续划线，不能间断，应占满平皿.划线不能交叉重复。 每次划完后接种环应灭菌。 下区与上区一定要有3~5次垂直交汇。 细菌培养方法 一般培养（需氧培养）： 培养温度：37℃（采用恒温培养箱） 培养时间：18～24h 二氧化碳培养法：烛缸法、二氧化碳培养箱 厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等 细菌的生长现象 细菌在液体培养基中的生长现象 混浊生长（大多数细菌）； 沉淀生长（链球菌）； 膜样生长（专性需氧菌，如结核分枝杆菌、枯草杆菌）。 细菌在半固体培养基中的生长现象 细菌在半固体培养基上生长主要看是否有鞭毛，即观察细菌的运动。 有鞭毛细菌：在培养基中沿穿刺线并向外扩散生长，穿刺线边缘模糊。 无鞭毛细菌：只沿穿刺线生长，穿刺线边缘清晰。 细菌在固体培养基中的生长现象 菌落：一个细菌不断分裂而成的细菌群体称之。在普通琼脂平板上观察菌落的形态、大小、表面、边缘、湿度、透明度；在血平板上还要观察溶血情况和色素等。分为光滑型(S)，粗糙型(R)和黏液型(M)。 菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。 菌 落 细菌代谢产物检查 实验材料 实验仪器 37℃恒温培养箱。 微生物材料 大肠杆菌、变形杆菌二者的普通平板。 培养基 糖的分解与生化反应：糖发酵培养基，甲基红培养基。 蛋白质分解与生化反应：蛋白胨水（吲哚试验），双糖铁培养基（硫化氢试验） 一 糖(醇)类发酵试验 原理：不同的细菌含有发酵不同糖(醇)的酶，因而发酵糖(醇)的能力各不相同。其产生的代谢产物亦不相同，如有的产酸产气，有的产酸不产气。酸的产生可利用指示剂来判定。在配制培养基时预先加入溴甲酚紫[pH5.2(黄色)~ 6.8(紫色)]，当发酵产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。气体产生可由发酵管中 有无气泡来证明。 实验步骤 编号 在微量五糖发酵管上分别标明发酵培养基名称，所接种的菌名和组号，下同。 接种 分别取葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖和甘露醇培养基各2支，按编号1号支接种大肠杆菌，2号接种变形杆菌。 将已接种好的培养基置37℃温箱中培养24h。 观察结果：被检细菌若能发酵培养基中的糖时，则使培养基的pH降低，这时培养基中的指示剂呈酸性反应(为黄色)，若发酵培养基中的糖产酸产气，则培养基不仅显酸色反应，并且在培养基中 有气体。 若被检细菌不分解培养基中的糖，则培养基不发生变化。 二 甲基红(Methyl red)试验 很多细菌，如大肠杆菌等分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸再被分解，产生甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH降低到4.5以下，这时若加甲基红