基因工程在制药工(西南大学 普通生物学).pptVIP

基因工程在制药上的应用 周家华 植物保护学院制药工程08级1班 转基因烟草与生物制药利用转基因烟草生产药物最早是由比利时234公司的研究人员发现的，他们在研究中意外地发现利用转基因烟草可以生产神经五肽，这开创了转基因烟草作为生物反应器生产药物的先例。 一、利用转基因烟草生产药物的研究利用基因工程技术手段，将某些生物制剂的编码基因转育到高等植物中表达，使过去只能在动物或微生物中生产的药物，由植物作为生物反应器（bioreactor）来生产，从而使这类生物制剂的生产变为高产高效，其产品对人类的使用更加安全。利用转基因植物生产出来的重组药用蛋白和肽的优点为：（1）植物容易转化，尤其烟草更易转化；（2）生产的药物使用安全，因植物不是人类病原体的宿主，与动物细胞培养比较，利用重组植物生产的药物不论提纯程度高低，都会大大降低人类病原微生物污染的机会；（3）容易达到优质高产； （4）投资规模小，成本低，投入产出比高。利用转基因植物生产药用重组蛋白的成本，仅为利用大肠杆菌发酵生产成本的1/10~1/50。烟草作为生物技术的模式植物和田间生物产量极高的大田作物， 在生物制药的研究领域显得更为活跃。利用转基因烟草生产药物的研究，指把重组的编码医用活性肽和疫苗等基因导入烟草，使烟草能够大量生产这些多肽和疫苗，这是工厂化农业或分子农业的有诱惑力的部分。迄今在世界范围内利用生物反应器开发的医药活性多肽和疫苗估计在100种以上。多肽药物中有人胰岛素、人生长激素、干扰素、白细胞介素、组织血纤维蛋白溶酶原激活剂（TPA） 、免疫球蛋白（lg） 、心钠素、降钙素、红细胞生长素（EPO） 、尿激酶、超氧化物歧化酶（SOD）等。疫苗有麻风杆菌疫苗、脑膜炎球菌疫苗、乙型肝炎疫苗、流感疫苗和人免疫缺陷病毒疫苗比用动物和微生物生产具有很大的优越性。全球许多生物技术公司在植物生物反应器的研究中更看中烟草，因为烟草繁殖系数非常高，而且单株生物产量很高。现在有B家生物技术公司正采用不同的技术路线将人类基因导入烟草中，以使烟草生产出各种符合人体需要的抗体、蛋白质和酶。 基因工程技术不仅能改变烟草中的基因，还能决定让它具备何种蛋白质、抗体和酶等。国外已用生物技术方法从烟草中提炼出一种酶，这种酶有望治疗一种因体内缺乏而造成的遗传疾病。美国弗吉尼亚州的科学家正在使用烟草生产另一种可作为抗癌药物的酶。目前美国已将从烟草中提取的化合物、抗体等生物制剂，用于治疗癌症以及其他疾病的临床试验。 二、利用烟草生产生物药的途径目前利用烟草作为生物反应器，重组基因生产生物制剂药物有两种转化途径。（1）用土壤农杆菌或农杆菌属（A grobac-terium）微生物介导转化法、基因枪法或其它标准转化技术，来培育转化后代遗传稳定的转基因烟草，所广泛采用的是红花烟草（Nicotiana tabaccum ）的常用栽培品种，或包括N.bethamiana 在内的其他品种，但其他种大田栽培技术和生物产量受一定限制。（2）用重组病毒感染植株，使其在复制时将所转基因在烟株中表达。最常用的两个宿主病毒系统是烟草—烟草花叶病毒（TMV）系统和豇豆—豇豆花叶病毒（CPMV）系统。例如，人们已利用来自TMV的载体在烟草中生产口服降压肽（血管紧张素82转化酶抑制物） ，以及在烟草中生产艾滋病毒或人免疫缺陷病毒（HIV）复制的抑制物 a-天花粉蛋白。 三、在烟草中表达抗体随着抗体基因在转基因植物中有效表达研究的日益增多，出现了植物抗体 （Plantibody）这一新名词，它是指将动物抗体基因或基因片段在转基因植物中表达的免疫性产物。 1.完整抗体在烟草中的表达 Hiatt等（1989）首先报道了在植物中表达重组抗体6D4的研究情况。 6D4属于lgG，它具有与一种合成磷酸酯（P3）结合的功能和催化某些羧酸酯水解的功能。他们采用两步的策略来使转化的烟草植株表达免疫球蛋白，第一步是用CaMV35S启动子调控下的编码重链和其信号序列的基因或编码K轻链和其信号序列的基因分别转化烟草，分别获得表达重链或轻链的转基因植株。还可以用切除了信号序列的编码重链或轻链的基因转化烟草。 三、在烟草中表达抗体 第二步，把表达重链的转基因植株和表达轻链的转基因植株杂交，获得表达完整抗体6D4的植株。对第一步获得的转基因植株进行分析，发现只有表达未经修改的编码全长的重链或轻链的基因的转基因植株中有免疫球蛋白的积累；相反，虽然在表达编码切除信号序列的重链或轻链的基因的转化植株中可以检测到一定水平的转录体，但是这些植株明显地不累积免疫球蛋白。这表明免疫球蛋白的信号序列对于蛋白质的积累是必要的。第二步获得的既表达轻链又表达重链基因的F1转基因植株，能够产生装配好的完整抗体，其表达量高达植株总蛋白的1%，而且这种抗体和杂交瘤（hybridoma）