第8章 酶通论解说.ppt

酵素的发现 enzyme (in yeast) enzyme是希腊文 en = in ， zyme = yeast 什么是酶？ 酶是生物催化剂 生物体一切生化反应都需酶催化才能进行！ 性能远远超过人造催化剂 定义：由活细胞产生的、 有高度专一性和高效催化作用的生物大分子。 一、酶催化作用的特点1. 提高反应速度，不改变平衡点;2. 只起催化作用，本身不消耗；3. 降低反应的活化能。1. 易失活（温和性）（1）酶浓度的可调性（2）通过激素调节酶活性 （3）反馈抑制调节酶活性 （4）抑制剂和激活剂 （5）别构调控、共价修饰、同工酶等 二、酶的化学本质及分类 ①经酸碱水解终产物是AA ②能被蛋白酶水解而失活 ③酶可变性失活 ④酶是两性电解质 ⑤具有不能通过半透膜等胶体性质 ⑥具有蛋白质的化学呈色反应 单纯酶 ：只有蛋白质 结合酶（缀合酶）：脱辅酶 + 辅助因子 结合酶中： 单独酶蛋白或辅助因子没有催化活性 一种酶蛋白一般只与一种辅助因子结合 同种辅助因子可与不同的酶蛋白结合 monomeric enzyme：一般由一条肽链组成 oligomeric enzyme：为寡聚蛋白，≥2个亚基 multienzyme complex：几种酶靠非共价键彼此嵌合而成。 由数个独立的酶组合起来形成络合体，催化一系列反应。（如糖代谢、脂代谢） 三、酶的命名和分类 底物1 ：底物2 + 反应性质+酶 酶的系统编号：4位数字 第一位：代表六大类反应类型 第二位：亚类（作用的基团或键的特点） 第三位：亚亚类（精确表示底物/产物的性质） 第四位：在亚亚类中的序号 —指酶对底物的选择性，也称特异性。 （1）锁钥学说——刚性构象 （2）诱导契合学说 （3）结构性质互补学说——静电效应、极性相同 （4）三点附着学说——立体异构专一性的酶 （一） 酶活力与酶促反应速度 酶活力就是酶催化反应的能力——能催化多快的反应通常以测出的酶促反应速度表示 1. 酶促反应速度的测定方法 2.活力单位 (U) 酶单位（U）： 在一定条件下、一定时间内、将一定量的 底物转化为产物所需的酶量。 如： 每小时催化1克底物每小时催化1ml某浓度溶液每分钟催化1ug底物 在标准条件下（25 ℃ ，最适pH和最适底物浓度）一分钟内催化1微摩尔底物转化为产物所需的酶量。1 IU= 1 ?mol / min——酶活力单位标准化 在标准条件下（25 ℃ ，最适pH和最适底物浓度）每秒钟催化1摩尔底物转化为产物所需的酶量。 1 Kat =1 mol/s= 60×106 IU ——酶活力单位标准化 酶活力测定实例 ①确定反应条件 20℃、pH=7，底物浓度 6g/l（过量），加入2mg固体脂肪酶 ②确定活力单位 每小时催化1克底物 1u= 1g/h ③ 测反应初速度 作产物甘油随时间增加的曲线，量出反应初速度值 ，换算为脂肪的消耗速度。如 8g/h ④换算活力8g/h / 1g/h=8u ⑤计算比活8u/2mg酶蛋白=4u/mg酶蛋白 六、核酶（ribozyme)(2) 1992年，Piccirilli等发现L19RNA具有氨酰酯酶的活性，催化氨酰酯水解。(3) L19RNA还有限制性内切酶作用：-CpUpCpUpN- + G-CpUpCpU +GpN(4) 1997年，Zhang和Cech用人造的RNA分子催化合成了肽链，表明RNA具有肽基转移酶活性。(5) 原核生物RNaseP和兔肌1，4- ?-葡聚糖分枝酶 （二）核酶的种类（自我催化）自我剪切：是转录后加工方式之一 （self- cleavage）自我剪接 （self-splicing）RNA既能携带遗传信息又有生物催化功能。 ——RNA可能早于蛋白质和DNA，是生命起源中首先出现的生物大分子切割癌基因、致病病毒基因 是具有催化作用的抗体 本质是免疫球蛋白——在易变区被赋予酶的属性，又被称为催化性抗体。 第一代抗体酶 （过渡态底物的抗体）1986年，Schultz与Lerner同时得到了具有催化活性的抗体；第二代抗体酶 （引入法）将催化基团及辅助因子引入到抗原抗体结合部位。 第三代抗体酶 （拷贝法）酶抗体抗抗体 酶工程：酶制剂在工业上的大规模生产及应用。普通酶工程、化学酶工程、生物酶工程 普通酶工程— 单纯生物提取 生物酶工程 利用DNA重组技术改造和生产酶的工程方法。 优点？ 不受天然来源限制，迅速，且易于诱变改造 酶的纯度鉴定： 聚丙烯酰胺凝胶电泳法 等电聚焦电泳法 （一）核酶：具有催化活性的RNA(1) 1982年，Cech首先发现四膜虫L19RNA既有RNA酶活性，又有RNA聚合