酶工程绪论..pptVIP

三．我国酶制剂工业的若干对策建议 1．走集约化、规模化经营 2． 加大科研投入 3． 发展具有自己知识产权的新技术 4 . 调整产品结构、大力开发新品种 (一) 不可逆性抑制作用 * 概念 抑制剂通常以共价键与酶活性中心的必需基团相结合，使酶失活。 * 举例 有机磷化合物 ?? 羟基酶 解毒 -- -- -- 解磷定(PAM) 重金属离子及砷化合物 ?? 巯基酶 解毒 -- -- -- 二巯基丙醇(BAL) （二） 可逆性抑制作用 * 概念 抑制剂通常以非共价键与酶或酶-底物复合物可逆性结合，使酶的活性降低或丧失；抑制剂可用透析、超滤等方法除去。 竞争性抑制 非竞争性抑制 反竞争性抑制 * 类型 + + + E E S I ES EI E P １. 竞争性抑制作用 + I EI E + S E + P ES 反应模式 * 举例 丙二酸与琥珀酸竞争琥珀酸脱氢酶 琥珀酸 琥珀酸脱氢酶 FAD FADH2 延胡索酸 磺胺类药物的抑菌机制 与对氨基苯甲酸竞争二氢叶酸合成酶 二氢蝶呤啶 ＋ 对氨基苯甲酸 ＋ 谷氨酸 二氢叶酸 合成酶 二氢叶酸 2. 非竞争性抑制 * 反应模式 E+S ES E+P + S － S + S － S + ESI EI E ES E P + I EI+S EIS + I ３. 反竞争性抑制 * 反应模式 E+S E+P ES + I ESI + + E S ES ESI E P （六）激活剂对反应速度的影响 激活剂(activator) 使酶由无活性变为有活性或使酶活性增加的物质。 ? 必需激活剂 (essential activator) ? 非必需激活剂 (non-essential activator) 酶活性测定和酶活性单位 酶的活性是指酶催化化学反应的能力，其衡量的标准是酶促反应速度。 酶促反应速度可在适宜的反应条件下，用单位时间内底物的消耗或产物的生成量来表示。 酶的活性单位是衡量酶活力大小的尺度，它反映在规定条件下，酶促反应在单位时间（s、min或h）内生成一定量（mg、μg、μmol等）的产物或消耗一定数量的底物所需的酶量。 国际单位(IU) 在特定的条件下，每分钟催化1μmol底物转化为产物所需的酶量为一个国际单位。 催量单位(katal) １催量(kat)是指在特定条件下，每秒钟使１mol底物转化为产物所需的酶量。 kat与IU的换算： 1 IU=16.67×10-9 kat 酶活力测定方法 对酶活力测定的要求是快速、简便、准确。 反应 酶活力测定 测定 酶活力测定的一般步骤 1. 根据酶催化的专一性，选择适宜的底物，并配制成一定浓度的底物溶液。 2. 根据酶的动力学性质，确定酶催化反应的温度、pH、底物浓度、激活剂浓度等反应条件。 3. 在一定的条件下，将一定量的酶液和底物溶液混合均匀，适时记下反应开始的时间。 4. 反应到一定的时间，取出适量的反应液，运用各种生化检测技术，测定产物的生成量或底物的减少量。 终止酶反应的方法很多，加热、变性、改变pH、降低温度。 测定可采用化学检测、光学检测、气体检测。 一种酶可以有多种测定方法，要根据实际情况选用。 固定化酶的活力测定 与水不溶性载体结合、在一定的空间范围内起催化作用的酶称为固定化酶。 1. 振荡测定法 称取一定质量的固定化酶，放进一定形状一定大小的容器中，加入一定量的底物溶液，在特定的条件下，一边振荡或搅拌，一边进行催化反应。经过一定时间，取出一定量的反应液进行酶活力测定。 固定化酶反应液的测定方法与游离酶反应液的测定方法完全相同。 2. 酶柱测定法 将一定量的固定化酶装进具有恒温装置的反应柱中，在适宜的条件下让底物溶液以一定的流速流过酶柱，收集流出的反应液。测定反应液中底物的消耗量或产物的生成量，再计算酶活力。 3.连续测定法 利用连续分光光度法等测定方法可以对固定化酶反应液进行连续测定，从而测定固定化酶的酶活力。 4.固定化酶的比活力测定 游离酶的比活力可以用每毫克（mg）酶蛋白或酶RNA所具有的酶活力单位数表示。在固定化酶中，一般采用每克（g）干固定化酶所具有的酶活力单位数表示。 在测定固定化酶的比活力时，可先用湿固定化酶测定其酶活力，再在一定的条件下干燥，称取固定化酶的干重，然后计算出固定化酶的比活力。也可以称取一定量的干固定化酶，让它在一定条件下充分溶胀后，进行酶活力测定，再计算出固定化酶的比活力。 对于酶膜、酶管、酶板等固