流式细胞术的质量控制课件.pptVIP

流式细胞术的质量控制和影响因素 河北省肿瘤研究所左连富 * * 一、标本的采集和固定方法的质量控制 标本采集是十分重要的环节，在标本的采集过程，需注意： ①手术切除的新鲜标本或活检针吸标本取材时，要避免出血坏死组织。 ②标本采集后要及时固定或深低温保存，以免组织发生自溶，DNA降解，而造成测试结果的误差。 ③固定剂要采用对组织细胞穿透性强的浓度。 例如70%的乙醇固定比75%以上的浓度固定效果好，高浓度的乙醇常造成细胞表面快速形成一个蛋白膜，致使细胞内的物质固定不良，有作者分析研究了自溶对DNA测定的影响，发现自溶的组织细胞常出现假性异倍体，且不固定的组织细胞随时间的延长，DNA含量呈梯度降低， 根据检测的目的，选择什么类型的固定剂，对流式检测质量也有显著的影响，例如细胞DNA的分析，使用醇类固定剂较好而不选择醛类固定剂，醛类固定剂明显影响细胞DNA荧光发射强度，实验证明，醛类固定剂对插入性荧光染料与核酸的结合有很强的干扰作用，其荧光强度仅相当于新鲜组织荧光强度的50-70%左右。 如果作流式免疫研究工作，采用新鲜组织是最好的选择，在不能及时检测又没有低温保存条件时，要根据所测物质在细胞内还是在细胞膜表面，在膜表面的抗原物质，以醛类固定剂为宜，尽管醛类固定剂产生的非特异性荧光较强，但不宜采用醇类固定剂，因醇类固定剂可使细胞表面的糖蛋白、脂蛋白脱落丢失，失去标记的位点