DGGE——陈芳、陈勍研讨.pptVIP

DGGE 变性梯度凝胶电泳 目录 DGGE的原理 DGGE的原理 DGGE的原理 影响因素 DNA分子大小 胶浓度 DNA序列 温度 变性剂梯度 电压/电流大小 电泳时间 DGGE的原理 相关概念 熔解温度（Tm）：即DNA熔解温度，指把DNA的双螺旋结构降解一半时的温度。DNA中G－C含量越高，Tm值越高，成正比关系。 短寡聚核苷酸： Tm = 4℃(G + C)+ 2℃(A + T) 长寡聚核苷酸： Tm = 81.5 + 16.6 x Log10[Na+] + 0.41 (%GC) – 600/size 变性域：一定温度与变性剂浓度下，DNA双链发生解链熔解的区域。 GC夹子：富含GC的一段DNA序列。 DGGE的原理 DGGE将凝胶设置在双重变性条件下：温度50~60 ℃，变性剂0~100%。 根据变性剂方向与电泳方向的关系，可将DGGE分为水平DGGE与垂直DGGE： DGGE的原理 DGGE的原理 Q：DGGE可以用来检测除最高温度解链区域以外的所有发生单个碱基变化的DNA片段，但是最后一个区域的解链，双链变单链，会出现什么结果？如何解决？ A：设计一段富含GC夹子的引物，使DNA 片段的一端加入一段富含 GC 的 DNA 片段（GC 夹子，一般 30-50 个碱基对）以解决双链DNA完全解链的问题。含有GC 夹子的 DNA 片段最高的解链区域在 GC 夹子