浙江温岭福立2-氯霉素测定技术(PPT)课件.pptVIP

Sanders P - China 2003 氯霉素测定技术 背景 2002年3月:泰国、越南、印尼、印度、孟加拉;77个样品中有16个含量超标 我国出口荷兰、法国等欧盟国家的乳制品等已被销毁或退回，欧盟及北美等发达国家加强进口商品的检测。 美国和加拿大不容许氯霉素用于最终为人类食用的动物身上；仅批准用于宠养动物疾病的治疗，如猫、狗和马 欧盟的96/23(EEC)指令中把氯霉素列入禁用药 : 氯霉素类药物是A类禁用药 日本规定所有最终为人类所食用的动物源性食品中氯霉素残留的容许量必须为零。 氯霉素分析 氯霉素类：别名左霉素，氯胺苯醇。 化学结构 毒理学 药物(代谢)动力学 兽医上禁止使用 代谢物 化学结构 测定方法 提取和净化 分析: GC/MS-MS等 氯霉素的化学结构 药理作用和用途 CAP是第一个广谱抗生素药，有广谱抑菌作用，对革兰氏阳性、阴性菌均有抑制作用，尤其对伤寒、副伤寒杆菌作用更强。其次为大肠杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌、流感杆菌和百日咳杆菌等，广泛用于临床医学及兽医方面的细菌性感染疾病的控制和治疗，应用至今已有40年的历史。 氯霉素的抗菌作用通过在生物体内将硝基还原成亚硝基，而后亚硝基不可逆地同线粒体细胞结合，抑制了细菌细胞壁形成所必需的蛋白质的合成。苯环对位上的硝基可增强这类“苯醇类”物质的抗菌作用。作为兽药,CAP最常被作为兽医用的治疗和预防用药,经口服后很快就被吸收。低计量时，CAP表现为抑菌作用。杀菌活性出线在较高剂量时。 用法及用量 混饲：每1000公斤饲料，鸡预防用100-300克，治疗用500-1000克； 混饮：每升水，鸡预防用100-300毫克，治疗用500毫克。 内服：一次量，每公斤体重，犊牛、狗、猫10-20毫克，每日二次。 静脉、肌肉或皮下注射：一次量，每公斤体重，禽20-50毫克；猪、羊10-20毫克；狗、猫20毫克，每日二次。 毒理学 氯霉素主要毒性反应是抑制骨髓造血机能，可引起粒细胞及血小板减少及再生障碍性贫血。口服有恶心、厌食、腹胀、腹泻等胃肠道反应。 目前一些国家和地区，还把氯霉素作为一种畜用饲料添加剂和动物疾病的治疗用药，这样必然会造成动物肌肉、内脏和乳汁中的残留，直接或间接威胁人类的健康。为此世界各国纷纷在临床上已严格控制使用。 药物(代谢)动力学 通过用同位素示踪的的方法研究。发现CAP排泄的主要途经是:粪便（64.3%）;尿(16.0%), 代谢:除了未经变化的CAP,有CAP-葡糖苷酸、CAP-碱、CAP-乙醇、CAP-草氨酸、CAP-乙酰芳基胺等。 氯霉素 高稳定性 较长的残留时间 当母体化合物残留量降到检测线以下,其与蛋白质结合的代谢物仍然能检测到 氯霉素测定技术 1) HPLC法 a.色谱柱:通常用C18柱或C8柱。 b.流动相：通常用甲醇-水；0.01M乙酸钠缓冲液(PH4.3)-乙腈。 c.UV测定波长：有280;278;270和285nm等。 HPLC法测定低限较差。一般在10ppb 氯霉素测定技术 2）HPLC/MS法 HPLC条件如上， 费用昂贵。 HPLC/MS/MS检测，测定低限一般在 0.1ppb。 氯霉素测定技术 3) GC法 GC法包括GC-ECD法和GC-MS法。在用GC法测定时，要将CAP衍生化。 由于硅烷化条件不同，可生成不同的产物，为了提高硅烷化程度，一般用：BSTFA99%+1%TMS; 氯霉素测定技术 4) ELISA法（酶联免疫法） 国外已有商品试剂合供应市场。 只限于样品筛选。 氯霉素检测特点 沸点高 极性强 质谱的背景噪音高 衍生化的作用 GC-MS方法中常用的衍生化方法 判断衍生化反应的指标 衍生化方法应用不当的弊端 常用的硅烷化试剂 硅烷化的技术要点 衍生化 技术发展趋势 1）开发高灵敏的检测方法的研究，降低测定检测限； 2）利用新的如：GC/NCI，GC/MS/MS、HPLC/MS、HPLC/MS/MS技术提高定性能力； 3）建立快速、灵敏的筛选方法： ELISA试剂合的开发： 4）建立适用于不同机体的灵敏度高、定性能力强的测定方法。 氯霉素衍生物NCI全扫描及EI/MS/MS比较质谱图 负离子化学电离 a. 先产生非常柔性 ( 1.0 eV) 之电子 CH4 + e- CH4+, CH3+, etc. + 2 e- (thermal) b. 电子被电负性之分子捕获 e- + MX MX- (non-dissociative) e- + MX M + X- (dissociati