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实验八 棒状杆菌与分枝杆菌 示教 结核分枝杆菌:抗酸染色法,液体、固体培养 麻风分枝杆菌:抗酸染色 白喉棒状杆菌: Albert染色法、革兰染色法 吕氏血清斜面、亚碲酸盐平板 操作 病人痰液(结核分枝杆菌)抗酸染色法 白喉棒状杆菌 Albert染色法 * 结核分枝杆菌(M.tuberculosis) 形态: 细长,略弯曲的杆菌,多聚集成团。无鞭毛,芽胞。 染色性: 不易着色,齐尼抗酸染色阳性。菌体呈红色,背景中其他物质蓝色。 培养特性: 专性需氧,最适37℃ ,营养要求高,生长缓慢,18h分裂一代。罗氏(Lowenstein-Jensen)培养基含蛋黄、甘油、马铃薯、无机盐、孔雀绿,2~6周可见菌落生长,菜花、颗粒或结节状菌落,乳白色或黄色,不透明。在液体培养基,生长于表面,有皱褶。 抗酸染色法(acid-fast stain) :以5%石炭酸复红染色,再用3%盐酸酒精脱色,然后用美蓝复染,则分枝杆菌呈红色(+),其他细菌和背景物质为蓝色(-)。 实验过程:取痰液→ 涂片(略厚)→干燥→固定 → 石炭酸复红染色8~10分钟后→用3%的盐酸酒精脱色约1~2分钟,脱色时轻摇玻片,直到涂片颜色脱去为止→ 水洗后,用碱性美蓝复染1分钟→水洗,印干 → 镜检 抗酸染色法 Albert染色法 制片同革兰染色, 甲液染5分钟→水洗→再以乙液(碘液)染1分钟 →水洗→印干→油镜检 白喉棒状杆菌(C.diphtheriae) 革兰染色:G +,菌体细长微弯,一端或两端膨大呈棒状,排列成V或L形(分裂时末端相连)。 Albert染色:见异染颗粒,菌体蓝绿色,异染颗粒蓝黑色(用于鉴定) 白喉棒状杆菌培养特性 吕氏血清斜面培养物:含凝固的血清,生长迅速。细小、灰白色、湿润、圆形突起的菌落。 亚碲酸钾血平板:黑色菌落。 亚碲酸盐 碲 (黑色) 还原 *
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