高效液相色谱法测定咖啡因课件.pptVIP

仪器分析实验 高效液相色谱法测定饮料中的咖啡因 主 要 内 容 一、实验目的 二、实验原理 三、实验步骤 四、注意事项 五、数据处理 一、实验目的 1、学习高效液相色谱法分离咖啡因的原理。 2、练习高效液相色谱仪的基本操作。 3、掌握高效液相色谱法进行定性及定量分析的基本方法。 二、实验原理 二、实验原理 色谱法分类 三、实验步骤 1、溶液的配制： 分别取1、2、3、4、5 mL 100 μg mL-1的咖啡因标准储备液，以超纯水稀释至50 mL，即得到20、40、60、80、100 μg mL-1的标准溶液。 2、绘制标准曲线： 待基线平稳后，吸取系列标准溶液，分别进样分析，绘制标准曲线。 3、样品测定： 吸取待测样品进样分析，根据其峰面积，依据标准曲线计算样品中咖啡因含量。 1、流动相和样品溶液需过滤后使用。 2、流动相还需脱气。 3、基线平稳后才能进样分析。 4、进样前要清洗微量进样器。 5、实验结束后要冲洗系统和色谱柱。 五、数据处理 1、根据标准溶液色谱图进行咖啡因成分的定性； 2、绘制标准曲线并打印； 2、计算样品中咖啡因含量。 End！ * * 咖啡中含咖啡因约1.2～1.8%，茶叶中含2.0～4.7%，可乐饮料和APC药片中均含有咖啡因。 其分子式为C8H10O2N4，结构式： 定量测定咖啡因的传统分析方法是采用萃取分光光度法。 利用混合物不同组分在固定相和流动相中分配系数(或吸附系数、渗透性等)的差异，使不同组分在作相对运动的两相中进行反复分配，实现分离的分析方法。 色谱法 色谱法 气体 超临界流体 气固色谱 （GSC） 气液色谱 （GLC） 超临界流体色谱 (SFC) 胶束电动色谱 （MEKC） 液液色谱 （LLC） 吸附色谱 （LSC） 尺寸排阻色谱 (SEC) 键合相色谱 (BPC) 离子交换色谱 (IEC) 亲和色谱 (AC) 毛细管电色谱 (CEC) 液固色谱 （LSC） 液体 高压泵 流动相溶剂 废液 色谱柱 进样口 检测器 高效液相色谱仪 保留值定性分析 校准曲线法定量分析 或 四、注意事项 *