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蛋白酶分离纯化技术 2005/2006 第七节 电泳分离 带电粒子在电场中向着与其本身所带电荷相反的电极移动的过程称为电泳。 一 电泳的基本原理 不同的蛋白酶的带电性质（带电量和带何种电荷），大小和形状不同，在一定的电场下，它们的移动方向和移动速度也不同，从而得到分离。 ? 移动方向 颗粒在电场中的移动方向，决定于它们所带电荷的种类 ? 移动速度 在电场中，颗粒的泳(移)动速度通常用迁移率来表示。 迁移率是指带电颗粒在单位电场强度下的泳动速度 ? 颗粒（蛋白酶）的形状 球型较快,泳动速度越快 ? 离子强度 溶液的离子强度越高，颗粒的泳动速度则越慢。反之则越快。一般电泳溶液的离子强度为0.02-0.2 二，电泳技术的应用范围 ? 酶的纯度鉴定（分析电泳） 三，主要采用的电泳技术(支持物) ? 聚丙烯酰胺凝胶电泳 ※ 丙烯酰胺 甲叉双丙烯酰胺 ◆均一胶和梯度胶 ◆梯度胶电泳的特点 ◆浓度梯度凝胶的配制 ◆碱性电泳系统 ◆酸性电泳系统 ◆ PAGE的用途 ?分析蛋白酶的纯度 ★蛋白酶在电场中的泳动速度决定于： ⊕蛋白酶的净电荷量 五 SDS在十二烷基硫酸钠(SDS) 存在的条件下所作的聚丙烯酰胺凝胶电泳,称为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，简称SDS◆ SDS的原理 ? SDS与蛋白结合，并引起蛋自构象的变化 SDS—PAGE中蛋白亚基Mr与电泳迁移率的关系 ? 蛋白亚基Mr的对数电泳迁移率成反比 Log Mr 电泳迁移率 ?植物绿叶粗蛋白中含大量负极泳动的蛋白 ?植物绿叶粗蛋白中含有向负极泳动的蛋白 ?植物绿叶粗蛋白中向负极泳动的蛋白的氨基酸组成 Table Amino acid contents of cathode buffer after crude protein from B. campestris ssp. chinensis var. utillis leaves was subjected to SDSAmino acid Content ( %) Amino acid Content ( %) Asp 2.03 Thr 1.32 Ser 4.11 Glu 3.02 Gly 4.56 Ala 2.09 Cys Val 5.19 Met IIe 1.13 Leu 1.97 Tyr 2.16 Phe 57.05 Lys 10.15 His 1.01 Arg 4.21 Pro Trp ?植物绿叶乙醇酸氧化酶含有向负极泳动的蛋白 ?植物绿叶乙醇酸氧化酶中向负极泳动的蛋白的氨基酸组成 Table Amino acid contents of cathode buffer after partially purified glycolate oxidase from B.