生物化学第一章 蛋白质12-2课件.ppt

第五节 蛋白质结构与功能的关系 一、一级结构与功能的关系 蛋白质一级结构包含了其分子的所有信息，并决定其高级结构，高级结构和其功能密切相关。 1、同功能蛋白质一级结构的种属差异与分子进化 同功能蛋白质：不同生物体中表现同一功能的蛋白质，又称同源蛋白质。 对比不同生物的同源蛋白质的氨基酸序列可以发现，它们长度相同或相近，而且许多位置的氨基酸是相同的。这些相同的氨基酸残基称为不变残基。 不变残基对于同源蛋白的功能是必需的。 其它对于不同种属有相当大变化的残基称为可变残基。 根据可变残基能推测生物种属间在系统发生上的联系。 同源蛋白质的氨基酸序列的相似性称为顺序同源性。 不同生物与人的Cytc的AA差异数目 2、一级结构的变异与分子病 分子病：由于基因突变导致蛋白质一级结构发生变异，使蛋白质的生物学功能减退或丧失，甚至造成生理功能的变化而引起的疾病，称为分子病。 镰刀状红细胞贫血病 正常红细胞与镰刀形红细胞的扫描电镜图 2、空间结构与功能的关系 核糖核酸酶的变性与复性 Anfinsen实验 肌红蛋白(Mb)由153个氨基酸残基组成,血红蛋白(Hb)的α亚基有141个氨基酸,β亚基有146个氨基酸残基。Mb and Hb的两种亚基氨基酸残基数和序列均有变化，但它们的三级结构几乎完全相同。 说明肌红蛋白和血红蛋白的α亚基和β亚基都起源于一个共同的祖先。 在血红蛋白和肌红蛋白分子中与辅基血红素相连的氨基酸都是组氨酸。说明不同氨基酸序列中只有关键的氨基酸不变才能产生相同的构象，执行相同的功能。 这种关键氨基酸通常提供形成蛋白质构象的必要基团。 肌红蛋白和血红蛋白的每条链都含一个血红素辅基。 血红素由四个吡咯环构成的原卟啉Ⅸ和一个铁离子组成。作为亚铁离子，可形成6个配位键：其中4个与卟啉与环的氮原子连接，第五个与His93相连，第六个与氧可逆结合附近有个His64辅助氧的结合。 血红蛋白与氧结合的协同性 肌红蛋白与血红蛋白都能与氧结合，但肌红蛋白是单体蛋白而血红蛋白是四聚体蛋白。 血红蛋白氧饱和度 在溶液中血红蛋白分子上已结合氧的位置数与可结合氧的位置数之比称为饱和度（saturation)。 肌红蛋白氧饱和度 Mb和Hb的氧合曲线比较 Hb的输氧功能 血红蛋白与氧结合的分子机制 脱氧血红蛋白亚 基间的交联键 第六节　蛋白质的性质 蛋白质两性解离性质和等电点 当蛋白质溶液在某一定pH值时，使某特定蛋白质分子上所带正负电荷相等，成为两性离子，在电场中既不向阳极也不向阴极移动，此时溶液的pH值即为该蛋白质的等电点 （isoelectric point，pI） 蛋白质电泳 蛋白质在溶液中解离成带电颗粒，在电场中可以向与其电荷相反的电极移动，这种现象称为：电泳 不同种类的蛋白质由于等电点的不同，在一个指定pH条件下所带电荷的性质和多少也不相同，加上它们分子量大小、颗粒形状的不同，因此在电场中移动的方向和速度各不相同。根据这一原理可用此方法对蛋白质进行分离和分析。 聚丙烯酰胺凝胶电泳 既可以作为蛋白质纯度检验方法，也可以纯化、制备蛋白质。 蛋白质胶体性质 蛋白质胶体性质的应用 透析法:利用蛋白质不能透过半透膜的的性质，将含有小分子杂质的蛋白质溶液放入透析袋再置于流水中，小分子杂质被透析出，大分子蛋白质留在袋中，以达到纯化蛋白质的目的。这种方法称为透析（dialysis）。 蛋白质的分子量及其测定 蛋白质的相对分子量很大，一般在104~106或更大。 蛋白质的分子量除了根据其化学组成来测定外，主要是利用蛋白质的某些物理化学性质来测定。 1、沉降速度法 是利用超速离心机测定蛋白质相对分子量的一种方法。 将蛋白质溶液放在超速离心机的离心管中进行超速离心。60 000~80 000rpm. 使蛋白质分子沉淀下来，当蛋白质的分子大小和形状相同时下沉速度也会相同，在离心管中产生一个明显的界面，利用光学系统可以观察到此界面的移动，从而测定蛋白质的沉降速度。 超离心法最为准确，但需昂贵的超速离心机。 用光学方法测定界面移动的速度即为蛋白质的离心沉降速度。 蛋白质的沉降速度与分子大小和形状有关，因为沉降系数S大体上和分子量成正比关系，故可应用超速离心法测定蛋白质分子量，但对分子形状高度不对称的大多数纤维状蛋白质不适用。 离心机结构示意图 沉降系数(sedimentation coefficient, S) 一种蛋白质在单位离心力场里的沉降速度。 常用S（Svedberg unit)表示。 已测得许多蛋白质的S值都在 1×10-13~200×10-13之间，因此，采用1×10-13S作为沉降系数的一个单位。 例如：某蛋白质的沉降系数为30×10-13S，可用30S表示。 由沉降系数S可根