实验二、琼脂糖凝胶电泳及DNA纯化-2课件.pptVIP

实验二琼脂糖凝胶电泳及DNA的纯化 7、用干净的刀片切出所需DNA条带，注意要在长波长（≥300nm）UV灯下操作，并快速操作，以免损伤DNA。应尽可能多地去除琼脂糖凝胶。 8、使用TAE缓冲液制作1％琼脂糖凝胶，然后对目的DNA进行琼脂糖凝胶电泳，在紫外灯下切出含有目的DNA的琼脂糖凝胶。 称量胶块重量，计算胶块体积。计算胶块体积时，以1mg=1μL进行计算(100mg=100μL)。 按照凝胶浓度，按下表提供的参数加入相应3倍体积的NaI。 均匀混合后55℃加热融化胶块。间断振荡混合，使胶块充分融化(约10分钟)。 加入20微升的硅胶树脂，充分混匀后室温放置20分钟。 注：硅胶树脂使用前，一定要将硅胶树脂液充分搅匀。 6. 离心（10，000 rpm、1分钟）后除去上清液。 注：此上清液在整个回收过程结束后，确认回收率较高时方可废弃。如果回收率较低时，可在此上清液中再次加入硅胶树脂液，重新吸附。 7. 在Microtube中加入800μL清洗液，振荡搅匀后室温静置10分钟，然后离心（10，000 rpm、1分钟），除去上清液。 注：请确认清洗液中已经加入指定体积的100%乙醇。 重复操作7（不需要静置10分钟） 注：为提高DNA片段的回收效率，此时应尽量除净上清液（完全风干至不含残留的乙醇气味） 9.