科大高分子课件(四)聚合物在生物高分子分离中的应用1课件.pptVIP

２．聚合物在蛋白质分离中的应用 １. 极端pH值法 pH高于蛋白质的pI时，毛细管内壁对蛋白质产生静电排斥抑制吸附，但是，蛋白质存在的自然状态为pH4－10，高pH如11.0时，容易使蛋白质变性或者水解。 pH小于1.5（熔融硅或石英的等电点）时，蛋白质的质子化导致其质荷比差别较小，分辨率难以提高。 对等电点相近的蛋白质不易实现分离。 一般认为，使蛋白质混合物分离的首选pH值应和蛋白质混合物的pKa值基本一致。 2. 添加小分子添加剂 表面活性剂：季铵盐和氟化的阳离子表面活性剂。 中性盐：如磷酸盐，硫酸钾等。 胺类：三乙醇胺、三乙胺、N-乙基二乙醇胺，N,　N, N’,　N’-四甲基-1,　3 -丁二胺（TMBD）等。 有机溶剂：醇类、乙腈、丙酮、四氢呋喃、二甲亚砜等，其中最常用的是甲醇和乙腈。 选用极端pH值或添加小分子添加剂的方法虽然能从一定程度上降低蛋白质吸附，但是容易导致蛋白质聚集和变性。目前最常用的方法是用聚合物对毛细管内壁进行改性处理。 ３.聚合物涂覆毛细管内壁抑制　　蛋白质吸附 (1) 化学键合的毛细管涂层 (2)物理吸附的毛细管涂层 羟乙基纤维素的改性 目前仍未找到一种普适性的涂层对所有种类的蛋白质分离都是有效的，因为不同种类的蛋白质等电点不同，这就需要用于管壁涂覆的聚合物涂层有较宽的pH适用范围，并且期望可以通过改变缓冲溶液的pH值实现对电