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白细胞分类计数参考方法..doc 16页

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目 次 前言……………………………………………………………………………………Ⅲ 范围………………………………………………………………………………4 总则………………………………………………………………………………4 方法…………………………………………………………………………………………4 3.1 样本采集…………………………………………………………………………4 3.2 血涂片制备和要求…………………………………………………………………………4 3.3 血涂片染色…………………………………………………………………………………4 3.4 需分类的外周血有核细胞…………………………………………………………………5 3.5 血涂片检查步骤……………………………………………………………………………5 3.6 检验人员要求和考核………………………………………………………………………6 附录A(规范性附录)常见外周血白细胞形态学………………………………………………7 附录B(规范性附录)计算公式…………………………………………………………………9 附录C(规范性附录)自动白细胞分类计数的性能评价………………………………………10 参考文献………………………………………………………………………………………16 前 言 为了保证白细胞分类计数结果具有溯源性和准确性,特制定本标准。本标准修改采用了美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)颁发的《白细胞分类计数参考方法和仪器评价方法》标准(H20-A)。 本标准从20XX年XX月XX日起实施。 本标准的附录A、附录B和附录C都是规范性附录。 本标准由卫生部医政司提出。 本标准由上海市临床检验中心负责起草。 本标准主要起草人:胡晓波、许蕾、宋颖、方心驰、张锦锋。 本标准由卫生部委托卫生部临床检验中心负责解释。 白细胞分类计数参考方法 范围 本标准规定了建立白细胞分类计数参考方法中有关样本采集、血涂片制备的要求、血涂片染色、血涂片有核细胞检查的步骤、对检验人员的要求和考核等内容。 本标准适用于建立白细胞分类计数参考方法的实验室 总则 本标准采用手工目视显微镜计数法作为白细胞分类计数的参考方法。 为了保证参考方法检测结果的精密度和准确性,建立参考方法的实验室必须进行比对。 方法 样本采集 将静脉血采集于EDTA-K2抗凝剂(液体或粉末状)中(浓度为每毫升血液含1.5~2.2mg EDTA-K2·H2O)。采血后立即混匀,应拒绝分析有肉眼可见凝块的样本。 血涂片制备和要求 血涂片制备 每份样本制作3张血涂片。要求所用玻片清洁、干燥、无尘,大小为25 mm×75mm,厚度为0.8~1.2mm。并有明确标记。如果样本中白细胞数量少时,需要制备更多血涂片(如6张)。 使用EDTA-K2抗凝血液样本时,应在采集后4小时内制备血涂片。在制片前,样本应充分混匀。注意,样本不能冷藏。 用楔形技术制备血涂片。在玻片近一端1/3处,加一滴(约0.05ml)充分混匀的血液,握住另一张较狭窄的、边缘光滑的推片,以30o~45o角使血滴沿推片迅速散开,快速、平稳地推动推片至玻片的另一端(见图1)。 3.2.1.4 在1小时内,用Romanowsky类型染液染色;或在1小时内,用无水甲醇(含水量﹤3%)固定后染色。 良好血涂片的要求 血膜至少长25mm,至玻片两侧边缘的距离至少为5mm。 血膜边缘要比玻片边缘窄,且边缘光滑,适用于油镜检查。 血细胞从厚区到薄区逐步均匀分布,末端呈方形或羽毛状。 血膜末端无粒状、划线或裂隙。所有这些情况会使白细胞集中在这些区域内。 在镜检区域内,白细胞形态应无人为异常改变。通常,随着保存时间的延长,抗凝血会造成白细胞形态的改变,如胞浆内形成空泡,核分解破裂等。应将抗凝血液保存时间的影响减小到最低限度。除部分淋巴细胞增生性疾病外,镜检区域内破损白细胞量应<2%。 无人为污染。 血涂片染色 采用Romanowsky类染料染色。Romanowsky类染料由亚甲蓝和/或亚甲蓝氧化产物(天青B),和卤化荧光素(通常为伊红B或Y)组成。良好的染色能准确鉴别成熟和未成熟白细胞或异常细胞。 染料的性能 Romanowsky类染料的质量直接影响染色效果。在pH6.4~7.0条件下,染料与细胞中特定成分(细胞核和细胞浆特殊颗粒)相互作用,产生典型的颜色,如细胞核染深紫色,红细胞染鲜亮的橙红色。 可接受的染色情况 粒细胞、单核细胞、淋巴细胞和其他细胞必须能显示清晰的核浆分界,能识别核染色质成分和细胞浆的颜色差异。 需分类的外周血有核细胞 外周血可见多种有核细胞。常见的有:中性分叶核粒细胞、中性杆状核粒细胞、淋巴细胞、异型淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞。外周血中正常白

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