第七章 蛋白质分离提纯2课件.ppt

第七章 蛋白质分离纯化和表征 第一节 蛋白质的酸碱性质 两性电解质，能与酸碱反应，可解离基团主要来自侧链基团解离。P290 sidechain and pKa 蛋白质的等电点:与氨基酸比较，大小与所含酸性与碱性氨基酸数目有关。 蛋白质的等离子点：在没有其它盐类干扰时，蛋白质质子供体解离出来的质子数目与质子受体结合的质子数相等时的pH isoionic point 第二节 蛋白质的分子形状和大小 MW6000-1000000 一、最低分子量：按化学组成测定：微量元素法，最低aa组成推断法。 二、利用渗透压测定分子量 利用半透膜进行测定p292 三、蛋白质的扩散和扩散系数 扩散：由高浓度向低浓度迁移的现象谓之扩散，扩散的速率可以用扩散系数来描述。 1. 扩散系数定义：当浓度梯度为一个单位时，在1s内，通过1cm2面积所扩散的溶质量。 2. 关系：D与蛋白质分子的大小、形状、溶剂的粘度有关。 可以用来测定蛋白质分子量 四. 蛋白质的沉降分析 概念：在超速离心场作用下，蛋白质分子密度大于溶剂密度时，产生沉降，沉降速率与蛋白质分子大小、密度(包装)，溶液的密度、粘度有关。利用超速离心机可以测定蛋白质的分子量，常用方法两种：沉降速率法和沉降平衡法。 1. 沉降速率法使用超速离心机(40-70w) 蛋白质在离心场中，沿旋转中心向外移动，其移动速率代表蛋白质分子的沉降速率。在离心场中，受到三种力