一种蛋白纯化的新思路,新方发法.docVIP

SSB亲和层析使用说明书 简介 噬菌体T7 单链DNA结合蛋白（SSB, single-stranded DNA binding protein）由696bp核苷酸编码，计算分子量为 25.6kDa（SDS凝胶电泳，该蛋白条带约在27 kDa位置）。它与单链DNA有很强的亲和性，且无序列特异性。利用这一特性，将SSB构建到不同宿主的表达载体中，可以实现在不同宿主中表达带有SSB标签的融合蛋白，从而与偶联在介质中的单链DNA高效、特异性结合，这种结合是可逆的，能够在温和、非变性的条件下通过改变洗脱液的pH值或盐浓度对融合蛋白进行洗脱，达到纯化某一目标蛋白的目的。 pSSB系列载体用于构建可诱导、高水平表达的基因或基因片段，表达的融合蛋白的N端或C端带有SSB标签。SSB标签可根据需要由位点特异的蛋白酶切除，pSSB系列质粒上多克隆位点上游包含有肠激酶（enterokinase）、凝血酶、TEV等识别序列。带有标签的蛋白可以通过免疫学方法进行检测，同时根据实验需要决定是否切除标签。 SSB亲和层析介质（经过特殊处理的ssDNA-cellulose）是专门设计用于纯化SSB融合蛋白及与目的蛋白有亲和作用的蛋白复合体的分离介质，通过盐离子梯度洗脱可得到高纯度的SSB融合蛋白。纯化条件温和，不引入其他物质，能够保证蛋白的活性。 pSSB载体 现有的pSSB载体系列按宿主不同可以分为以下四类