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- 2016-12-22 发布于天津
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现代生物科技专题专题1、基因工程
什么是基因工程?
1.1DNA重组技术的基本工具
一、“分子手术刀”——限制性核酸内切酶(限制酶)
㈠来源:主要是从原核生物中分离纯化出来的。
㈡功能:能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开,因此具有专一性。
㈢结果:经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式,黏性末端和平末端。
二、“分子缝合针”——DNA连接酶
㈠功能:将切下来的DNA片段拼接成新的DNA分子。连接部位:磷酸二酯键,不是氢键。
㈡两种DNA连接酶(E·coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶)的比较:⒈相同点:都缝合磷酸二酯键。⒉区别:E·coliDNA连接酶来源于T4噬菌体,只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来;而T4DNA连接酶能缝合两种末端,但连接平末端的之间的效率较低。
㈢与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端,形成磷酸二酯键。
三、“分子运输车”——载体(与细胞膜上的载体有什么区别?)
㈠作为载体的必要条件:能在受体细胞中复制并稳定保存;具有一至多个限制酶切点,供外源DNA片段插入;具有标记基因,供重组DNA的鉴定和选择;对受体细胞无害、易分离。
㈡最常用的载体是质粒:是一种裸露
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