PFGE-科室培训资料O157版方案.doc

大肠杆菌O157（志贺氏菌宋内血清型）PFGE标准方法 第一天 胶块的制备 在Falcon 2054管上标记样品名称和空白对照，分别加入约2ml（1ml）细胞悬浊液（CSB）； 在1.5ml eppendorf管上标记好对应样品的名称； 在模具上标记好对应样品的名称； 用CSB湿润接种环，从培养皿上刮取适量细菌，均匀悬浊于CSB中， 用bioMerieux Vitek colorimeter测其OD值，并调整至3.6~4.5（4.0）。如果OD值大于4.5，加入CSB稀释；如果OD值小于3.6，增加菌量提高其浓度。 取400μl细菌悬浊液于相应的1.5ml eppendorf管中，置于37℃水浴中孵 育5分钟。将剩余的细菌悬浊液置于冰上直到胶块制备好放在水浴摇床中。 从水浴箱中取出eppendorf管，每管加入20μl蛋白酶K（储存液浓度为 20mg/ml）混匀，使其终浓度为0.5mg/ml。 制备好1%Seakem Gold：1%SDS，放于56℃水浴箱中。 在eppendorf管中加入400μl的1% Seakem Gold：1%SDS，用枪头轻轻 混匀。 将混合物加入模具，避免气泡产生，在室温下凝固10-15分钟。 注意事项： 用后的接种环要放在指定的废弃物容器中。 细胞悬浊液、蛋白酶K要置于冰上。 在混合细胞悬浊液和1% Seakem Gold：1%SDS时要避免气泡