分子生物学导论-分子生物学研究方法.pptVIP

第一节 凝胶电泳技术 ◆ 溴化乙锭(ethidium bromide，EB)是一种荧光染料，EB分子可嵌入核酸双链的碱基对之间，在紫外线激发下，发出红色荧光。即使每条DNA带中仅含有0.05μg的微量DNA，也可以被清晰地检测出来。 ◆ 银染色: 银染色液中的银离子(Ag+)可与核酸形成稳定的复合物，然后用还原剂如甲醛 使Ag+还原成银颗粒，可把核酸电泳带染色黑褐色。主要用于聚丙烯酰胺凝胶电泳染色，也用于琼脂糖凝胶染色。其灵敏度比EB高200倍.但银染色后，DNA不宜回收。 第二节 核酸的分离技术 第三节 基因扩增与定点突变技术 PCR的反应原理 片段扩增倍数 2. 荧光信号 前15个循环信号作为荧光本底信号(baseline）。 3～15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍被设置成荧光阈值的缺省值。手动设置时，将大于荧光背景值和阴性对照的荧光最高值设置为荧光阈值，是进入指数期的最初阶段。 超过域值的荧光信号为真正的信号。 Ct值：PCR扩增过程中，扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环次数。 模板DNA量越多，荧光达到域值的循环数越少，即Ct值越小。Log模板起始浓度与Ct值呈线性关系。 (1) 测定OD260/OD280比值，明确RNA的含量和质量 OD260/OD280≈ 2.0， 若小于2.0，有蛋白质污染。