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The Gs –Linked Receptor GPR3 Maintains Meiotic Arrest in Mammalian Oocytes 在哺乳動物卵母細胞內維持減數分裂初期停止的Gs –Linked Receptor GPR3 卵的成長 第一次減數分裂 第二次減數分裂 Prophase Arrest 初級卵母細胞在進行排卵作用時卵會停止在第一次減數分裂的Prophase 的階段 而本次的實驗就是探討如何在此階段停止 並懷疑其停止的原因是由於卵母細胞 細胞膜上擁有某種受器(Receptor)可以接受 周圍細胞所釋放出來的化學物質 來對卵母細胞進行停止的調控 為何懷疑在卵母細胞膜上有受器 把位於成熟濾泡內的卵母細胞(已prophase arrest)移出 發現卵母細胞會回復減數分裂(resume meiosis spontaneously) Prophase 和 Metaphase 在顯微鏡下觀察的不同 Prophase 核膜沒有破裂 核仁是完整的 Metaphase 有染色體濃縮的現象 有紡垂絲的形成 Metaphase? and Metaphase ?? Metaphase? 有 紡垂絲(spindle) 沒有 極體(polar body) Metaphase?? 有紡垂絲 也有極體 Metaphase?? Metaphase ??(放大) 要使卵母細胞的減數分裂prophase arrest 必須活化在卵母細胞內的訊息分子 而其中又以Gs protein最為重要 Gs protein Gs protein 是一種 G 蛋白 所謂的 G蛋白就是可藉由一連串的蛋白活化的過程 達成活化具有特殊功能的蛋白質來進行某種機制的運作 以下是一般的 G protein 活化的過程 Prophase Arrest的機制 Gs protein 具有使卵母細胞進行 Prophase Arrest 的功能 然而 Gs protein 必須接受其他的蛋白活化(Receptor) 由以上兩點可推測 在卵母細胞膜上應該有某種受器可以接受外界的刺激 並活化Gs protein 為了辨認出此種receptor 我們查詢由 cDNA library 所組成的EST EST ( expression sequence tag database)一種資料庫可以找尋某物種某時期某種細胞有表現的的DNA序列 找尋可以成為G protein –coupled receptors (GPCRs)其特徵是 7-transmembrane structure 可以使G protein 活化 G protein –coupled receptors 查詢結果 1000多個哺乳動物基因會產生 7-transmembrane protein 其中有15個被發現在卵母細胞的EST資料庫 15個之中有一個叫Gpr3 receptor 這就是的主題了 辨認它(Gpr3)和 Prophase Arrest 有無直接的關係 The Gs –Linked Receptor GPR3 Maintains Meiotic Arrest in Mammalian Oocytes 在哺乳動物卵母細胞內維持 減數分裂初期停止 Gs –Linked Receptor GPR3 接下來 就是要證明Gpr3 receptor 確實與卵母細胞的Prophase Arrest 有關 實驗一 Gpr3 RNA 的 1: In situ hybridization 2: RT-PCR In situ hybridization 的對象 : 老鼠的卵巢 發現 Gpr3 RNA 主要出現在卵母細胞內 In situ hybridization 為了進一步比較 Gpr3 RNA 的濃度使用了RT-PCR 的技術 RT-PCR (Reverse transcription polymerase chain reaction) 可利用 RNA 反轉錄成 cDNA 越多的 RNA 反轉錄生成的 cDNA 越多 再利 用特別設計的探針則可比較出不同細胞 RNA 含量的多寡 實驗一 結果 發現在卵母細胞內的Gpr3 RNA 的濃度遠高於周圍的體細胞 由本實驗可以知道 Gpr3 與卵母細胞有密切的關係 在接下來的實驗會用到基因缺失鼠 基因缺失鼠(gene knockout mice) 利用生物技術的方式 製造具有某一特定基因缺陷(失去功能)的老鼠 藉由和正常老鼠的比較來了