第13章 细胞衰老与凋亡课件.ppt

Chapter 13.细胞衰老与凋亡 13.1 细胞衰老 ?Hayflick界限 1961年，Hayflick 首次报道了体外培养殖分裂的极限。他利用来自胚胎和成体的成纤维细胞进行体外培养，发现胚胎的成纤维细胞分裂传代50次后开始衰退和死亡，而来自成年组织的成纤维细胞只能培养15～30代就开始死亡。 细胞，至少是培养的细胞，不是不死的，而是有一定的寿命； 它们的增殖能力不是无限的，而是有一定的界限，这就是Hayflick界限。 细胞衰老的特征 ◆细胞内水分减少 ◆色素生成和色素颗粒沉积 ◆细胞核 ◆内质网 ◆细胞质膜 ◆线粒体 ◆蛋白质合成的变化 ◆ 细胞核的变化 ◆内质网的变化 ◆ 膜系统的变化 ◆线粒体的变化 细胞衰老的理论 ◆衰老的基因程序理论 ◆衰老的损伤积累理论 ◆细胞衰老的端粒假说 ◆细胞衰老的线粒体损伤论 ◆自由基理论 ●氧化性损伤学说 13.2 细胞凋亡(Apoptosis) 细胞凋亡的生化特征 ◆细胞凋亡的主要特征是形成大小为180～200bp特征性的DNA ladders ◆凋亡细胞 tTG（组织转谷氨酰胺酶 tissue Transglutaminase）积累并达到较高水平 细胞凋亡的检测 ◆形态学观测：染色法、透射和扫描电镜观察 ◆DNA电泳：DNA片段就呈现出梯状条带 ◆TUNEL测定法，即DNA断裂的原位末端标记法 ◆彗星电泳法（comet assay） ◆流式细胞分析 根据凋亡细胞DNA断裂和丢失，采用碘化丙啶使DNA 产生激发荧光，用流式细胞仪检出凋亡的亚二倍体细 胞，同时又能观察细胞的周期状态。 13.3 程序性细胞死亡的机理 ◆程序性细胞死亡遗传学相关基因 ●程序性死亡的遗传控制 ●程序性死亡抑制基因 ◆程序性细胞死亡的过程 ●死亡激活期 ●死亡执行期 ◆秀丽新小杆线虫中参与程序性细胞死亡控制的基因 ●决定死亡的两个基因，即ces-1(ces表示CE细胞存活的调控基因)和ces-2基因 ●执行死亡的4个基因：ced-3、ced-4、ced-9和egl-1基因。 ●7个与死亡细胞被吞噬细胞所吞噬的基因，即ced-1、ced-2、ced-5、ced-6、ced-7、ced-10和ced-11。 ●死亡细胞在吞噬体中被降解的基因 ●ced-3、ced-4、ced-9和egl1-4个基因构成了线虫执行死亡的“死亡机器”(death machinery); ●ced-3 和ced-4是细胞杀手; ●ced-9可抵消ced-3和ced-4 的作用，防止细胞被杀死，因此是存活因子; ●进一步的研究发现真正的细胞杀手是ced-3而不是ced-4。 Caspase家族与凋亡 ◆能够被caspase切割的靶蛋白 ●蛋白激酶 ●核纤层蛋白 ●细胞结构蛋白 ●与DNA修复相关的酶类 ●caspase激活的DNase抑制蛋白。 Caspase活化 Caspase自身以非活化的Procaspase存在，其激活依赖于其他的Caspase在它的天冬氨酸位点裂解活化或自身活化 胞外信号分子诱导的细胞凋亡途径 ·凋亡信号通路 当细胞接受凋亡信号分子(Fas,TNF等)后，凋亡细胞表面信号分子受体相互聚集并与细胞内的衔接蛋白(Adaptor protein)结合，这些衔接蛋白又募集Procaspases聚集在受体部位，Procaspase相互活化并产生级联反应，使细胞凋亡 ·下游Caspases活化后，作用底物： 裂解核纤层蛋白，导致细胞核形成凋亡小体； 裂解DNase结合蛋白，使DNase释放，降解DNA形成DNA Ladder; 裂解参与细胞连接或附着的骨架和其他蛋白，使凋亡细胞皱缩、脱落，便于细胞吞噬； 导致膜脂PS重排，便于吞噬细胞识别并吞噬。 Bcl-2家族、线粒体与细胞凋亡 ◆Bcl-2是一种原癌基因，是ced-9在哺乳类中的同源物，能抑制细胞凋亡；与线粒体及内质网膜相结合；Bcl-2蛋白的羧基末端有一穿膜的结构域；Bcl-2家族成员的基因中，常常含有三个保守的Bcl-2同源区，即BH1，BH2和BH3 ◆Bcl-2、线粒体与细胞凋亡 ◆哺乳动物细胞中发现的Apaf2即是CytC BCL-2家族成员 Bcl-2、线粒体与细胞凋亡 ◆当Caspase8活化后，它一方面作用于Procaspase3，另 一方面使Bid裂解成2个片段，其中含BH3结构域的C-端 片段被运送到线粒体，与Bcl-2/Bax的BH3结构域形成 复合物，导致细胞色素C释放。CytC与胞质中Ced4同源 物Apaf-1(凋亡蛋白酶活化因子apoptosis protease activating fac