第四章 核酸化学课件.ppt

（3）mRNA的一级结构 真核生物mRNA的一级结构可用下式表示 : polyA 3′-非密码区 密码区 5′-非密码区 5′-帽子 5′-cap：m7G(5′)pppNmp 5′-cap cap0: m7G(5′)pppNp cap1: m7G(5′)pppNmpNp cap2: m7G(5′)pppNmpNmpNp 5′-cap的功能 (1) 防止mRNA被核酸酶降解。 (2) 为mRNA翻译活性所必需。 (3) 与蛋白质合成的正确起始有关。 3′-polyA : polyA的残基数20~200个，或更多。 polyA的功能 (1) 保护mRNA，免受核酸外切酶的作用。 (2) 与翻译有关，没有polyA翻译活性降低。 (3) 与mRNA从细胞核转移到细胞质有关。 RNA前体 成熟RNA（有功能的RNA） 断裂、修剪、修饰 （三）RNA的二级结构 大多数天然RNA是一条单链，通过自身回折形成部分螺旋区，部分非螺旋区。 少数病毒RNA如水稻矮缩病毒、呼肠孤病毒、伤瘤病毒等RNA是双链螺旋，类似于DNA的双螺旋结构。 RNA中双螺旋结构稳定的因素主要是碱基堆积力，其次是氢键。 1．tRNA的二级结构 （1）aa接受臂（amino acid arm） （2）二氢尿嘧啶环 （dihydrouridine loop, DHU loop） （3）反密码环（anticodon loop） （4）额外环（extra loop） （5）TψC环（TψC loop） 1980年牛心线粒体tRNAser只有63个核苷酸，沉降常数3S，缺少D环和D臂，呈二叶草型。 近年来发现2种线虫线粒体tRNA也不是标准的三叶草结构。 2．rRNA的二级结构 3．mRNA的二级结构 （四）RNA的三级结构 tRNA的三级结构 六、核酸酶类 包括核酸水解酶、合成酶、连接酶等。 （一）核酸水解酶的分类 1．底物：核糖核酸酶（ribonuclease, RNase） 脱氧核糖核酸酶（deoxyribonuclease, DNase） 2．作用方式：核酸内切酶（endonuclease） 3．按磷酸二酯键断裂的方式 4．其它：如双链酶、单链酶等 核酸外切酶（exonuclease） （二）核糖核酸酶类 1．牛胰核糖核酸酶（pancreatic ribonuclease, 简称RNase A或RNase I） 2．核糖核酸酶T1（ribonuclease T1，简称RNase T1） 3．核糖核酸酶T2（ribonuclease T2，简称RNase T2） 主要作用点为Ap残基，水解速度AUGC A U C G A G （三）脱氧核糖核酸酶 1．牛胰脱氧核糖核酸酶 （pancreatic deoxyribonuclease简称DNase I） 2．牛脾脱氧核糖核酸酶 （spleen deoxyribonuclease, 简称DNase II） 3．限制性内切酶（restriction endonuclease） 简称限制酶 限制性内切酶主要降解外源的未经特殊修饰的DNA，对自身起了保护作用。 发现概况: （1）限制性内切酶的特征 ① 具有严格的碱基专一性，有专一的识别顺序、切点 ② 粘性未端，平整末端 （2）限制性内切酶的命名 ECoRI （3）限制性内切酶举例 （四）非专一性核酸酶类（nonspecific nuclease） 介绍二种外切酶 1．蛇毒磷酸二酯酶（venom phosphodiesterase） 5?-核苷酸 蛇毒磷酸二酯酶对末端磷酸基有严格的要求 最慢，几乎不作用，水解速度再降低100倍 较慢，水解速度降低10倍 最快 水解速度 寡核苷酸 橘青霉磷酸二酯酶专一性： 与蛇毒磷酸二酯酶相同 2．牛脾磷酸二酯酶 对末端磷酸基的要求与蛇毒磷酸二酯酶相反 + 3′-核苷酸 （五）磷酸单酯酶 将单核苷酸或寡核苷酸末端的磷酸单酯键切开，得到磷酸和其它产物 1．特异性磷酸单酯酶 2．非特异性磷酸单酯酶 磷酸基无论在3′或5′位，都能水解，如E. Coli磷酸单酯酶 （1） 磷酸基连在5′位才能水解，如牛精液5′-核苷酸酶 （2） 磷酸基连在3′位才能水解，如麦芽3′一核苷酸酶 七、核酸的性质和最常用的研究方法 （一）一般性质：分子大