第1章蛋白质的结构与功能(阅读).ppt

蛋白质的结构与功能 第一节 蛋白质的分子组成 第二节 蛋白质的分子结构 第三节 蛋白质的结构与功能 第四节 蛋白质的理化性质与分离提纯 蛋白质(protein)是由许多氨基酸(amino acids)通过肽键(peptide bond)相连形成的高分子含氮化合物。 蛋白质是生命活动的物质基础，是含量最丰富的生物大分子，具有多种生物学功能，称为功能大分子。 蛋白质的生物学重要性 蛋白质是各组织的主要有机成分，干重45%，一般组织含17~20%。 2. 蛋白质具有重要的生物学功能 1）催化功能---酶 2）载运功能---膜蛋白、血红蛋白 3）运动功能---鞭毛、肌肉蛋白 4）防御功能---免疫球蛋白 5）调控功能---激素、生物活性肽 6）结构功能---皮、毛、骨、牙、细胞骨架 7）神经传导---构成神经递质乙酰胆碱、五羟色氨 。 3. 氧化供能 蛋白质的分子组成The Molecular Component of Protein ? 蛋白质的元素组成 主要有C、H、O、N和S。 有些蛋白质含有少量P或金属元素Fe、Cu、Zn、Mn、Co、Mo，个别蛋白质还含有 I 。 ? 蛋白质元素组成的特点 通过样品含氮量计算蛋白质含量的公式： 一、氨基酸 ——蛋白质的基本组成单位 存在自然界中的氨基酸有300余种，但组成人体蛋白质的氨基酸仅有20种，且均属 L-?-氨基酸（甘氨酸除外）。 什么是α-氨基酸，L-型氨基酸？ 1、非极性疏水性氨基酸 含有非极性的侧链，具有疏水性（Gly除外） 种类：Gly、 Ala、 Val、Leu、Ile、Phe、 Pro 2、极性中性氨基酸 侧链含有-OH或-SH、-CONH2等极性基团，具有亲水性，但在中性水溶液中不电离。 种类：Ser、Thr、Tyr、Trp、Cys、Met、Asn、Gln 3、酸性氨基酸 侧链含有-COOH，易解离出H+，具有酸性。 种类：Asp、Glu 4、碱性氨基酸 侧链带有易接受H+的基团而具有碱性。如ε-NH2、胍基和咪唑基。 种类：His、Lys、Arg 　 习惯分类方法 芳香族氨基酸：Trp、Tyr、Phe 含羟基氨基酸：Ser、Thr、Tyr 含硫氨基酸：Cys、Met 杂环族氨基酸：His 杂环族亚氨基酸：Pro 支链氨基酸：Val、Leu、Ile 　 几种特殊氨基酸 Gly：无手性碳原子。 Pro：为环状亚氨基酸。 Cys：可形成二硫键。 （2） 氨基酸的光吸收 构成蛋白质的20种氨基酸在可见光区都没有光吸收，但在远紫外区(220nm)均有光吸收。 在近紫外区(220-300nm)只有酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸有吸收光的能力。 组成天然蛋白质分子的20种氨基酸中，只有色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸对紫外光有光吸收。其吸收峰在280nm左右，以色氨酸吸收最强。 可利用此性质采用紫外分分光度法测定蛋白质的含量。 酪氨酸的?max＝275nm，?275=1.4×103; 苯丙氨酸的?max＝257nm，?257=2.0×102; 色氨酸的?max＝280nm，?280=5.6×103; 氨基酸分子是一种两性电解质。 氨基酸分子带有相等正、负电荷时，溶液pH值称为该氨基酸的等电点（pI）。 氨基酸等电点的确定： 氨基酸的等电点可由其分子上解离基团的解离常数来确定。 侧链不含离解基团的中性氨基酸， pI = (pK′1 + pK′2 )/2 对于侧链含有可解离基团的氨基酸，其pI值也决定于两性离子两边的pK′值的算术平均值。 酸性氨基酸：pI = (pK′1 + pK′2 )/2 碱性氨基酸：pI = (pK′2 + pK′3 )/2 与茚三酮的反应---AA定性和定量的测定方法 与甲醛的反应---测定游离氨基量。 桑格反应---N端的测定方法 艾德曼反应---N端的测定方法 与荧光胺反应---AA含量的测定方法 与5,5’-双硫基-双(2-硝基苯甲酸)反应—半胱氨酸含量的测定 原理： 氨基酸 + 茚三酮试剂 篮紫色化合物 吸收峰:570nm （5） 氨基酸的显色 氨 基 酸 显 色 试 剂 颜 色 各种氨基酸 0.1％-0.5％茚三酮丙酮(或乙醇)溶液 蓝紫色 多种氨基酸 1％吲哚醌酒精冰醋酸溶液 不同氨基酸显不同颜色 各种氨基酸 1％澳酚蓝酒精溶液