第1节位点特异性重组(免费阅读).pptVIP

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2016-12-23 发布于重庆
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第1节位点特异性重组(免费阅读).ppt

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第六章位点特异性重组和DNA转座 * Introduction 保守性位点特异性重组（conservative site-specific recombination, CSSR）转座重组（transpositional recombination） 1.保守性位点特异性重组（CSSR） 1.保守性位点特异性重组（CSSR） 1.1重组位点 During λ intergration, recombination always occurs at exactly the same nucleotide sequences within the two recombination sites, one on the phage DNA and the other on the bacterial DNA. 1.保守性位点特异性重组（CSSR） 1.1重组位点 ①重组酶识别序列对称分布 ②交换区（crossover region）重组位点重组位点 ① ① ① ① ② ② 1.保守性位点特异性重组（CSSR） 1.2重组结果 ①DNA片段的插入 1.保守性位点特异性重组（CSSR） 1.2重组结果 ②DNA片段的缺失 1.保守性位点特异性重组（CSSR） 1.2重组结果 ③DNA片段的到位 1.保守性位点特异性重组（CSSR） 1.2重组结果 ①DNA片段的插入 ②DNA片段的缺失 ③DNA片段的到位 1.保守性位点特异性重组（CSSR） 1.3重组酶 1.3.1丝氨酸重组酶 1.3.2酪氨酸重组酶 1.保守性位点特异性重组（CSSR） 1.3.1丝氨酸重组酶 1.3.1.1结构 Li W, et al. Science. 2005, 309(5738):1210-1215. R2 R1 R3 R4 1.3.1丝氨酸重组酶 1.3.1.2功能 ①重组酶丝氨酸残基的-OH攻击交换区特定磷酸二酯键，重组酶通过磷酸二酯键与DNA断裂端相连 ②另外一个断裂DNA的-OH攻击重组酶与DNA磷酸二酯键，重新形成DNA的磷酸二酯键，丝氨酸重组酶释放DNA 1.3.1.3丝氨酸重组酶特异位点重组功能 ①丝氨酸重组酶的4个亚基分别切断2个DNA分子的4条链，并且重组酶通过磷酸二酯键与DNA断裂端相连 1.3.1.3丝氨酸重组酶特异位点重组功能 ②重组酶二聚体亚基旋转进行DNA片段交换 1.3.1.3丝氨酸重组酶特异位点重组功能 ②重组酶二聚体亚基旋转进行DNA片段交换 R2 R1 R3 R4 R2 R3 R1 R4 Li W, et al. Science. 2005, 309(5738): 1210-1215. 1.3.1.3丝氨酸重组酶特异位点重组功能 ③DNA链上-OH攻击重组酶-DNA磷酸二酯键，重新形成DNA磷酸二酯，释放重组酶，完成重组 1.3.1.3丝氨酸重组酶特异位点重组功能 ①丝氨酸重组酶的4个亚基分别切断2个DNA分子的4条链，并且重组酶通过磷酸二酯键与DNA断裂端相连 ②重组酶二聚体亚基旋转进行DNA片段交换 ③DNA链上-OH攻击重组酶-DNA磷酸二酯键，重新形成DNA磷酸二酯，释放重组酶，完成重组总结重组位点重组结果丝氨酸重组酶 2.转座 2.转座 2.1转座因子（transposable element）或转座子（transposon）从DNA上的一个地方移位到另外一个地方的遗传因子。 2.2转座因子的类型 2.2.1 DNA转座子 2.2.2 LTR (long terminal repeat) 反转录转座子 2.2.3 聚腺苷酸(poly-A)反转录转座子 2.2转座因子的类型 2.2.1 DNA转座子 2.2.1.1自主转座子（autonomous transposon） 2.2.1.2非自主转座子（nonautonomous transposon） 2.2转座因子的类型 2.2.1.1 DNA自主转座子 ① 反向重复序列（具有转座酶识别序列） ② 转座酶基因 2.2转座因子的类型 2.2.1.2 DNA非自主转座子 ① 反向重复序列（具有转座酶识别序列） 2.2转座因子的类型 2.2.1 DNA转座子 2.2.1.1自主转座子 ① 反向重复序列（具有转座酶识别序列） ② 转座酶基因 2.2.1.2非自主转座子 ① 反向重复序列（具有转座酶识别序列） *