高效液相色谱法精编.pptVIP

高效液相色谱检测器 (4). 示差折光检测器 除紫外检测器之外应用最多的检测器； 可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值。差值与浓度呈正比。 通用型检测器（每种物质具有不同的折光指数）； 灵敏度低、对温度敏感、不能用于梯度洗脱； 偏转式、反射式和干涉型三种； 高效液相色谱检测器 (5).电导检测器 其作用原理是根据物质在某些介质中电离后所产生电导变化来测定电离物质含量。 五 高效液相色谱分离类型的选择 要正确地选择色谱分离方法，首先必须尽可能多的 了解样品的有关性质，其次必须熟悉各种色谱方法的主要特点及其应用范围。选择色谱分离方法的主要根据 是样品的相对分子质量的大小，在水中和有机溶剂中的溶解度，极性和稳定程度以及化学结构等物理、化学性质。 1、相对分子质量 对于相对分子质量较低（一般在200以下），挥发性比较好，加热又不易分解的样品，可以选择气相色谱法进行分析。相对分子质量在200 ~ 2000的化合物，可用液固吸附、液-液分配和离子交换色谱法。相对分子质量高于2000，则可用空间排阻色谱法。 高效液相色谱分离类型的选择  高效液相色谱法由于不受被分离物质的挥发性、热稳定性及相对分子质量的限制，具有分高效能高，分析速度快，检测灵敏度高和应用范围广的特点。故不仅是一种分析检测技术，也是一种分离纯化制备的手段。在无机和有机化学、生物化学、食品分析、医药研究、临床检验、环境分析等各个领域都有极广泛的应用。 第四节 高效液相色谱法的应用 一、在无机分析中的应用 阴离子分析 双柱；薄壳型阴离子交换树脂分离柱(3×250mm), 流动相：0.003mol.·L-1 NaHCO3 / 0.0024 mol·L-1 Na2CO3，流量138 mL/h。 七种阴离子在20分钟内基本上得到完全分离，各组分含量在3～50 ppm。 二、在生物化学中的应用 生物化学分析中的应用十分广泛 氨基酸的分离检测、有机酸、有机胺、类固醇、卟啉、糖类、维生素、多肽、核糖核酸等等 三、在食品分析中的应用 食品添加剂：如苏丹红 食品安全与食品质量控制 四、在环境分析中与监测中的应用 由于工农业的发展，更多的有毒废物与农药的使用，从而使得液相色谱在环境分析与环境监测中的作用越来越大，主要应用如下： 多环芳烃、农药、酚类、真菌毒素、异腈酸酯等等。 特别是有机农药方面的检测。 固定相：薄壳型硅胶(37 ～50?m) 流动相：正己烷 流 速：1.5 mL/min 色谱柱：50cm?2.5mm(内径) 检测器：差示折光检测器 可对水果、蔬菜中的农药残留量进行分析。 1. 有机氯农药残留量分析 2. 稠环芳烃的分析 稠环芳烃多为致癌物质。 固定相：十八烷基硅烷化键合相 流动相：20%甲醇-水 ～100%甲醇 线性梯度淋洗，2%/min 流 速：1mL/min 柱 温：50 oC 柱 压：70 ?104 Pa 检测器：紫外检测器 高效液相色谱仪应用实例 五、在生命科学与药物分析中的应用（最热门的） 由于色谱诸多的特点与高效和的分离能力，使得其在生命科学与药物分析中的应用十分广泛。如新药开发、以及药物在生物体内的代谢研究。 组学研究 THANKS! 作业：2；8 第十二章 高效液相色谱分析 一、概述 高效液相色谱法是60年代末70年代初在经典液相色谱法的基础上发展起来的一种新型分离分折技术。由于它使用了细颗粒高效率的固定相和均匀填充技术，分离效率极高。柱效一般可达104理论塔板数，能实现极为有效的分离。可用于髙沸点、相对分子质量大、热稳定性差的有机化合物及各种离子的分离分析。它利用被分离组分极性、分子尺寸、离子交换能力的差别以及生物分子间亲和力的差別进行分离。可用多种溶剂作流动相，通过改变流动相组成来改善分离效果。因此，分离能力比气相色谱法更强。 高效液相色谱法的分类 一、液固吸附色谱法（LSC） 二、液液分配色谱法（LLC） 三、离子色谱法（IC） 四、空间排阻色谱法（SEC） 五、亲和色谱 六、手性色谱 七、 金属配合物色谱 八、离子对色谱 二、固定相和流动相 (一) 液固吸附色谱法（LSC）固定相 流动相为液体，固定相为固体吸附剂 液固色谱使用的固定相，多数是有吸附活性的吸附剂，常用的有硅胶、氧化铝、分子筛、聚酰胺等。按其结构可分为表面多孔型和全多孔微粒型两类 。 分离机制：利用溶质分子占据固定相表面吸附活性中心能力的差异 适用：分离极性化合物 流动相：底剂（烷烃）+