第5章凝胶渗透色谱(精编).pptVIP

3.2.1平衡排除理论 依据色谱方程，认为分离处于平衡时，即溶质在胶体孔洞内的停滞时间大于它扩散入与扩散出孔洞所需的时间，分离的过程就既不受扩散控制也不受扩散影响。 胶体的孔洞具有一定的孔径分布，大分子可以渗透进去的孔洞数目比小分子少，即排除体积大。同时，大分子渗透进孔洞的深度也比小分子浅，容易被淋洗液冲出来。所以在色谱柱内，大分子经过的路程比小分子短，先流出来，而小分子后出来。当溶质分子相当大时，以致全部都被排斥在胶体孔洞之外，K=0，即VR＝VM。而当溶质分子相当小时，K＝1，VR＝VM+VS。 3.2.2限制扩散理论 该理论认为分离不处于平衡态，即溶质分子扩散入与扩散出孔洞的时间近乎它的停滞时间。胶体孔洞内部的流体摩擦效应使溶质的扩散速度降低，溶质分子越大则摩擦效应就越大。因此，大分子难于向孔洞内扩散渗透，先被淋洗出来。 3.2.3流动分离理论 流动分离理论的模型把填料的孔洞假设成细长管子。当溶液在细长管子中高速流动时，就存在流速场，即管子中间的液体比靠近管壁的液体流动快，就形成一个抛物线的流速场。 由于半径大，大分子的溶质在流动时不能靠壁而被集中到管子的中心区域，故靠近管壁的是小分子。在抛物线形流速场的影响下，中心区域大分子的流速较快，从而先从柱子中流出来；小分子靠近管壁流速慢，经过足够长的距离后就可以到达分离的目的。 4.数据处理 4.1凝胶色谱谱图 凝胶色谱谱图与一般的色谱谱图是一样的，横坐标代表色谱保留值，纵坐标代表流出液体的浓度。 横坐标的值表示了样品的淋洗体积或级分，这个值是与分子量的对数值成比例的，表示了样品的分子量； 纵坐标的值是与该级分的样品量有关，表征了样品在某一级分下的质量分数。 因此凝胶色谱谱图可看作是以分子量的对数值为变量的微分质量分布曲线。 对于单分散相的高聚物样品，其色谱的保留值（在凝胶色谱中称为峰位值）即表征了样品的分子量。一般这种单分散性的色谱曲线可以用高斯分布函数表示： 式中，V为淋洗体积；Vp为色谱峰的峰位淋洗体积；W(V)为样品的质量函数；W0为样品质量；σ为标准偏差。 对于多分散性样品，其凝胶色谱曲线是许多单分散性样品分布曲线的叠加，如下图所示。曲线下面的面积正比与样品量，是各单分散性样品量的总和。这种曲线的形状不一定与高斯分布函数一致，而是和样品的分子量分布状态有关，因此色谱峰的峰位不直接表示样品的平均分子量。在这种情况下，需通过数据处理来获得平均分子量。 4.2分子量校正曲线 由凝胶色谱图计算样品的分子量分布的关键是把凝胶色谱曲线中的淋洗体积V转化为分子量M，这种分子量的对数值与淋洗体积之间关系曲线（lgM－V曲线）称为分子量校正曲线。该曲线测量的精度直接影响到凝胶色谱测定的分子量分布精度，因此分子量校正曲线的确定成为凝胶色谱中关键的一环。 校正曲线的测定方法很多，大致可分为两大类即直接校正法和间接校正法。 4.2.1单分散性标样校正法 选用一系列与被测样品同类型的不同分子量的窄分散性（d1.1）标样，先用其他方法精确地测定其平均分子量，然后与被测样品在同样条件下进行GPC分析。每个窄分布标样的峰为淋洗体积与其平均分子量相对应，这样就可做出lgM－V曲线如下图所示。 在上图中A点称为排斥极限，凡是分子量在比此点大的分子均被排斥在凝胶孔之外；B点称为渗透极限，凡是分子量小于此值的都可以渗透如全部孔隙。 对于线性校正曲线可用下列方程表示： 式中，Ve为淋洗体积（也可用保留时间）；M代表分子量；A和B为常数，B0。 如果校正曲线是非线性的，则可用曲线方程或多段折线方程表示。 这种测定校正曲线的方法简便，准确性高，但获得于被测样品相同类型的窄分布高分子样品比较困难，限制了它在实际中的应用。 4.2.2渐近试差法 在实际工作中，有时不易获得窄分布的标样，可选用2～3个不同分子量的聚合物标样（平均分子量需精测量，为已知的）采用一种数学处理方法即渐近试差法。可计算出校正曲线，由于这种方法不需要窄分布样品，因此也可称为宽分布样品测定校正曲线法。 先对已知样品进行GPC分析，得到GPC谱图，然后依照线性校正曲线任意规定一组A和B的值，得到一条校正曲线，依照此方程计算已知标样平均分子量，把所得到的数据与原始数据进行比较，如不符合再修正A、B值，再重新计算，这样反复试差，直至计算出的结果与已知标样相差在允许的误差范围内（一般小于5％～10％），即可确定校正曲线。这种方法用手算是比较麻烦的，目前已能编制成程序由计算机来完成。 渐近试差法的优点是不需要窄分布标样，实验操作方便，其缺点是不能凝胶柱的排斥和渗透极限，只能适用与线性的校正曲线，得到的校正曲线也只是近似的。 4.2.