第7章 茎尖培养和脱毒快繁技术.pptVIP

* 第七章 茎尖培养和脱毒、快繁技术 7.1 茎尖培养： 7.2 脱毒技术： 7.3 快速繁殖技术 第七章 茎尖培养和脱毒、快繁技术： 7.1 茎尖培养 茎尖培养的概念 茎尖培养的应用： 3. 茎尖培养的方法 7.1 茎尖培养 茎尖培养的概念 7.1 茎尖培养 茎尖培养的概念： 茎尖分生组织培养：（meristem）,不带叶原基，250um； 茎尖培养：(shoot tip), 带1-3个叶原基，100-1000um； 芽培养：(shoot)，1mm。 2. 茎尖培养的应用： 形态建成研究：茎尖分生组织 无病株生产：茎尖 营养繁殖：芽培养 7.1 茎尖培养 茎尖培养技术： 材料消毒： 茎尖分离： 培养方法： 对培养基和培养条件的要求： 7.1 茎尖培养 茎尖培养技术： 材料消毒：在温室种植或田间种植的健康植株上取枝条，必要时母株可用杀菌剂处理；在实验室切取2-3cm长的芽，去掉较大的叶片，进行常规的表面灭菌； 7.1 茎尖培养 茎尖培养技术： 茎尖分离：将灭菌的芽置放有湿滤纸的无菌培养皿中，置体视显微镜下，依次用镊子或解剖刀剥去叶片直至露出生长点，用锋利的解剖刀片把带或不带叶原基的分生组织切下来，直接接种到培养基上； 7.1 茎尖培养 茎尖培养技术： 培养方法：固体培养、液体纸桥培养（易愈伤化时） 7.1 茎尖培养 茎尖培养技术： 对培养基和培养条件的要求： 一般可用MS培养基，加少量的生长素（不用2,4-D）和细胞分裂素；GA3有时对抑制愈伤等有一定的效果。 7.1 茎尖培养 脱毒苗培育的意义： 脱毒原理： 茎尖培养脱毒技术和程序： 病毒检测： 几种植物的脱毒技术 7.2 脱毒技术： 脱毒苗培育的意义： 是无性繁殖作物消除病毒的有效手段：病毒一般不能通过种子传播到下一代，所以无性繁殖植物易受病毒的侵害，造成产量品质的下降；脱毒苗一般可提高产量30-70%。 7.2 脱毒技术： 脱毒原理： 热处理：使病毒钝化，可在活体进行，如香石竹在38度处理2个月可消除茎内所有病毒； 茎尖培养：病毒在体内的分布不均匀，顶端分生组织一般不含病毒（维管系统缺乏、细胞分裂速度快、其他的抑制机制）； 两者结合可以提高效果； 愈伤组织培养 7.2 脱毒技术： 茎尖培养脱毒技术和程序： 外植体的分离：2-3cm新梢，去掉大叶片，灭菌后，在解剖镜下切取带1-2个叶原基的茎尖； 培养方法：MS＋BA0.5＋NAA0.05,3-4月，继代3-4次，少部分长出芽； 结合热处理脱毒：先热处理植株，取1mm的茎尖培养；试管苗热处理； 结合化学疗法脱毒：如抗病毒制剂Virazole可以抑制病毒复制； 7.2 脱毒技术： 病毒检测：经过茎尖培养的植物不一定全是无毒的，需要经过严格的鉴定才能用材料消毒： 指示植物法（indicator）： 抗血清鉴定法： 酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA): 电镜法： 7.2 脱毒技术： 病毒检测 指示植物法（indicator）：提取脱毒苗的汁液，接种（汁液接种、芽嫁接等）到能产生明显的典型症状的别种植物（指示植物）上，根据接种后指示植物的表现确定脱毒是否彻底。 指示植物的选择：1.对特定病毒敏感，且症状表现明显；3.本身无毒（如种子繁殖）；2.可常年栽培； 常用：千日红、笕色藜、野生马铃薯、曼陀罗、心叶烟等。 7.2 脱毒技术： 病毒检测： 抗血清鉴定法：用纯化的病毒注射动物，在动物的血清中产生抗体。抗原与抗体之间存在十分特异的凝集和沉淀反应。已知病毒的抗血清可以用来鉴定这种病毒的存在与否。试管沉淀反应、点滴沉淀实验、凝聚试验等。 7.2 脱毒技术： 病毒检测： 酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA):在血清法的基础上，结合酶反应发展起来。在抗体上带上某种酶，抗原和抗体结合成的免疫复合物就有了酶活性，在反应体系中加入酶底物，底物在酶的催化下，形成有色反应物。从而使检测的灵敏度大大提高。 7.2 脱毒技术： 病毒检测： 电镜法：用电镜直接观察病毒颗粒，通过病毒颗粒的形态直接鉴定病毒的存在。比较快速、可靠；但需要电镜和样本制备技术。 7.2 脱毒技术： 几种植物的脱毒技术 马铃薯、甘薯、甘蔗、苹果、草莓、柑桔、香蕉 7.2 脱毒技术： 试管苗无性繁殖的意义： 常用的快繁类型及特点： 快繁的一般步骤： 提高试管苗繁殖速度的措施： 种苗繁殖体系 7.3 快速繁殖技术（micropropagation ） 试管苗无性繁殖的意义： 与脱毒技术结合，生产无毒苗原种；苹果、桃子、枣、大蒜、康乃馨、唐菖蒲、 加快果树、花卉、林木、药材等繁殖系数低的植物优良品种的繁殖速度；月季、杜鹃（扦插难生根） 是兰花唯一的大规模无性繁殖