青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum) 绿色荧光蛋白标记研究.docVIP

青枯雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum） 绿色荧光蛋白标记研究 车建美1,2，蓝江林1，刘 波1 （1福建省农业科学院农业生物资源研究所，福州 350003；2福建农林大学生物农药与化学生物学教育部重点实验室，福州 350002） 摘要：【目的】采用电击法对青枯雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum）进行gfp/luxAB基因双标记，研究标记前后菌株的生长差异、以及侵染性和致病性的变化。【方法】通过电击法进行青枯雷尔氏菌的遗传转化，采用番茄组培苗对标记菌株的侵染条件和侵染过程进行初步研究。【结果】成功地采用gfp/luxAB基因标记了青枯雷尔氏菌。标记后的菌体细胞形状与亲本菌株形状相同，均为长椭圆形，近杆状，整个细胞呈现绿色荧光，PCR结果表明，从标记青枯雷尔氏菌菌株的基因组DNA中扩增出约3.0 kb的gfp基因片段。标记菌在对数生长期，荧光素酶活性快速增加，到稳定期，荧光素酶活性降低。在无选择压力条件下连续移植20次，仍然保持均匀而且强烈的绿色荧光，荧光稳定性保持在100%。gfp基因标记前后的菌株在培养的最适温度、最佳pH值及生长曲线上基本一致，在番茄组培苗内的侵染路线相同，致病力均达到90%以上。【结论】利用gfp和luxAB融合基因成功转入青枯雷尔氏菌，融合基因在标记菌株中的表达高效稳定。导入的