高效液相色谱法测定忍冬藤中木犀草素的含量.docVIP

高效液相色谱法测定忍冬藤中木犀草素的含量 〔摘要〕目的： 建立忍冬藤中木犀草素的含量测定方法。方法： 采用高效液相色谱法；Agilent ZORBAX SB- C18 （4.6 mm X250mm）色谱柱；流动相：甲醇-0.3%磷酸水溶液（47：53），流速为每分钟1ml; 柱温30℃，检测波长为350nm。进样量10μl，等梯度洗脱，对其进行含量测定。结果 该方法简便、准确，适用于忍冬藤的质量控制。 〔关键词〕忍冬藤；没 忍冬藤为忍冬科植物忍冬（Lonicera japonica Thunb）的干燥茎枝，我国忍冬属植物资源丰富，共有98种，分布于全国各个省区，尤以西南各省最多。忍冬藤收载于2010年版一部，具有清热解毒、疏风通络功能。临床用于温病发热、热毒血痢、痈舯疮疡、风湿热痹。中国药典2010年版一部将绿原酸作为忍冬藤质量控制的指标，但忍冬藤除了含绿原酸外，还含有环烯醚萜苷类、黄酮类、皂苷类等成分，现代药理研究表明忍冬藤中有机酸和黄酮类均有明显的生理活性，绿原酸和咖啡酸具有显著的抗菌作用，木犀草素等黄酮类化合物具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗癌等多种药理作用，现已备受人们关注，因此，仅以绿原酸作为忍冬藤质量控制的指标，存在一定的局限性，有必要建立多指标评价该药材质量的分析方法，为此，我们经过不断地研究摸索，建立了忍冬藤中木犀草素的含量测定方法，并对三批忍冬藤药材进行了含量测定，结果显示该方法简单、快速、可靠，可用于忍冬藤药材的质量控制。 木犀草素的含量测定： 仪器与试药色谱条件的确定 仪器与试剂：日本岛津2010型高效液相色谱仪，自动进样 器、紫外检测器、岛津2010化学工作站数据处理。甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂皆为分析纯。 色谱条件的选择：色谱柱：Agilent ZORBAX SB- C18 4.6X250mm，流动相为甲醇-0.3%磷酸水溶液（47：53），流速为每分钟1ml; 柱温30℃，检测波长为350nm。进样量：10μl；理论塔板数按木犀草素峰计算不低于5000。依上述色谱条件，精密吸取木犀草素对照品溶液和供试品溶液各10μｌ，分别进样。在对照品溶液和供试品溶液色谱图相应位置上，有相同保留时间的色谱峰。见图1、2。 图1木犀草素对照品色谱图 图2供试品色谱图 2、提取条件的选择：我们在忍冬藤药材中木犀草素的提取过程中，采用了超声提取法和热回流法。 2.1、供试品溶液的制备：分别精密称定过40目筛的药材粉末各2.0g，其中一份放置于50ｍl具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇25ｍl,密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率25ｋHz）30分种，放冷，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μｍ滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液1；另一份用75%乙醇加热回流3次，每次25ｍl，每次回流1.5小时，合并提取液。回收乙醇至无醇味，并置于蒸发皿中水浴蒸干，用适量甲醇将提取物溶解并转移至25ｍl容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，用0.45μｍ滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液2。 2.2、对照品溶液的制备：取木犀草素对照品适量，精密称定，制成每ｍl含木犀草素1.5μｇ的溶液，即得。 测定方法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。测定结果见表1。 表1提取条件的选择 提取方法 序号 取样量 （g） 对照品峰面积 样品峰面积 含量 （%） 热回流法 1 2.0074 59091.5 73008.5 0.00231 超声提取法 2 2.0058 59091.5 43678.5 0.00139 通过上表可以看出，热回流法提取物中木犀草素含量比超声提取法提取物中木犀草素含量高67%，说明热回流法提取木犀草素效果很好，因此，本次研究决定采用热回流法做为忍冬藤中木犀草素的提取方法。 对照品来源： 购于中国药品生物制品检定所，木犀草素批号为111520-200504，供含量测定用，符合对照品纯度要求。 线性关系考察： 精密称取干燥至恒重的木犀草素对照品10mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得木犀草素浓度为0.1mg/ml的对照品溶液。分别吸取对照品溶液0.5ml，1ml，1.5ml，2.0ml，2.5ml，分别置100 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，分别得含木犀草素0.5μg/ｍl、1.0μg/ｍl、1.5μg/ｍl、2.0μg/ｍl、2.5μg/ｍl的对照品溶液，按上述色谱条件测定，结果见表2，以峰面积为横坐标，木犀草素含量为纵坐标绘制标准曲线（见图3），回归方程为f(x)=2.43721e-005*x+0.074959，相关系数r=0.9996。 结果表明木犀草素在0.5μg/ｍl ~2.5μg/ｍl范围内线性关系良好。 表2　标准曲线的制备 对