1.1DNA重组技术的基本工具讲述.ppt

* 【应城一中生物】 【应城一中生物】 * 专题1 基 因 工 程 基因工程是指按照人们的意愿，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做DNA重组技术。 基因工程的概念 1900年孟德尔基因分离定律和自由组合定律的再度提出 早期基础理论 1910年摩尔根证明基因在染色体上，并提出基因的连锁互换定律 早期基础理论 1944年艾弗里证明DNA是遗传物质 DNA可从一种生物个体转移到另一种生物个体 后期基础理论 1953年沃森、克里克提出DNA的双螺旋结构模型 后期基础理论 1963年尼伦伯格和马太破译编码氨基酸的 遗传密码，1966年霍拉纳用实验加以证明。 后期基础理论 技术发明 1967年基因转移载体的发现 1970年工具酶的发现 1965年氨基酸测序和1977年DNA测序技术的发明 1972年DNA体外重组的实现 1973年重组DNA表达实验的成功 1980年第一例转基因动物和1983年第一例转基因 植物问世 1988年PCR技术的发明 常用工具 分子手术刀——限制酶 分子缝合针——DNA连接酶 分子运输车——运载体 1.1 DNA重组技术的基本工具 一、 限制性核酸内切酶（限制酶）—“分子手术刀” 1 2 3 来源？ 种类？ 识别？ 特点？ 结果？ 活动1 阅读课本4-5页相关内容，回答下列问题 项 目 内 容 来源 种类及命名 识别序列数目 作用特点 作用结果 主要来源于 命名：属名头字母（大写）+种名头2字母+ 菌株名（通常省略）+罗马数字 EcoRI 、SmaI 一种限制酶只能识别 , 并在特定的位点切割DNA分子的 。 大多数限制酶的识别序列由 个核苷酸组成 少数的识别序列由 个核苷酸组成 6 4、5或8 种类：现已从300微生物中分离出约4000种限制酶 限制（性核酸内切）酶 原核生物 一种特定的核苷酸序列 磷酸二酯键 产生黏性末端或平末端 仔细观察各限制酶 识别的特定序列有何特点？ 限制酶所识别的序列的特点是：呈现碱基互补对称，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的 ，称为回文序列 限制酶的识别序列 G 1’ 2’ 3’ 5’ 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ A 3’,5’-磷酸二酯键 4’ 磷酸二酯键 　 黏性末端　　　　 黏性末端 EcoRI限制酶的切割 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 平末端　　　平末端 SmaI限制酶的切割 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。 G A A T T C C T T A A G G A A T T C C T T A A G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G 用同种限制酶切割(EcoRⅠ) 拓展思维 缺口怎么办？ G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G 拓展思维 DNA连接酶作用的化学键是什么？ DNA连接酶有哪些种类？ 其来源和特点分别是什么？ 活动2 二、 DNA连接酶—“分子缝合针” 阅读课本5-6页相关内容，回答下列问题 1 2 项目 内容 种类 (比较) 作用结果 E.coli DNA连接酶 T4 DNA连接酶 只作用于 末端 主要作用于 末端， 还可作用于 末端，但效率较低 黏性 平 黏性 恢复被限制酶切开的两个核苷酸 之间的磷酸二酯键，形成重组DNA分子。 DNA连接酶 两DNA片段要具有互补的黏性末端才能拼起来 DNA连接酶的缝合作用 DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？ 比较 DNA连接酶 DNA聚合酶 不 同 点 作用对象 链DNA分子 单个脱氧核苷酸连接成一条与模板链互补的DNA单链 模板 需要DNA一条链为模板 作用结果 相同点 作用实质 形成 键 双 不要 形成重组DNA分子 形成新的DNA分子 磷酸二酯 【典题精析】 例2 DNA连接酶与DNA聚合酶比