第二章微生物发酵产酶201311141.pptVIP

上节课重难点 酶生物合成模式 产酶工艺条件及其调节控制 产酶细胞的选择 培养基的配置 细胞活化和扩大培养 发酵条件的控制 酶的产量高； 易培养和管理； 产酶稳定性好； 利于酶的分离纯化； 安全可靠，无毒性。 碳源、氮源 无机盐、生长因子 活化：提高活力 扩大培养：增加数量 pH； 温度； 溶氧； 酶生物合成模式 定义 图示 合成的调节 mRNA 解决方法 同步合成型 （生长偶联型） 延续合成型 （部分生长偶联型） 中期合成型 （特殊的生长偶联型） 滞后合成型 （非生长偶联型） 2.4 酶发酵动力学 研究发酵过程中细胞生长速率、产物生成速率、基质消耗速率以及环境因素对这些速率的影响规律的学科。 包括：细胞生长动力学，产物生成动力学，基质消耗动力学。 2.4.1 细胞生长动力学 主要研究细胞生长速率以及外界环境因素对细胞生长速度影响的规律。 1、细胞生长动力学方程（1950，莫诺德） Rx= dX dt =μx Rx：细胞生长速率 X：细胞浓度 μ：比生长速率 dX dt =μx μ= dX dt × 1 x = μmS Ks+S S：限制性基质的浓度 μm：最大比生长速率，指限制性底物浓度过量时的比生长速率。 当SKs时，μ=μm Ks：莫诺德常数，指比生长速率达到最大比生长速率一半时的限制性底物浓度。 2、细胞生长动力学方程的变型 连续全混流生物反应器进行连续发酵 dX dt = μmSX Ks+S -DX =（μ-D）X D：稀释率，单位时间内流加的培养液与发酵液体积之比 Dμ:dX/dt0，发酵液中细胞浓度不断增加，限制性基质浓度降低，比生长速率减小，当μ=D时，重新达到稳态。 D=μ:dX/dt=0，发酵液中细胞浓度保持不变。 Dμ:dX/dt0，发酵液中细胞浓度不断下降，限制性基质浓度相对升高，比生长速率增加，当μ=D时，达到稳态。 Dμm:发酵液中细胞浓度趋于0，无法达到新的稳态。 2.4.2 产酶动力学 研究细胞产酶速率及各种环境因素对产酶速率的影响规律。 1、产酶动力学方程 RE=dE/dt=（αμ+β）·X RE：产酶速率 X：细胞浓度 μ：细胞比生长速率 α ：生长偶联的比产酶系数 β ：非生长偶联的比产酶系数 E：酶浓度 t：时间 2、不同产酶模式的产酶动力学方程 （1）同步合成型（生长偶联型） dE/dt=（αμ+β）·X 0 dE/dt=αμ·X β （2）延续合成型（部分生长偶联型） dE/dt=（αμ+β）·X dE/dt=αμ·X+ β·X （3）中期合成型（特殊生长偶联型） dE/dt=（αμ+β）·X 0 无酶产生 α 有阻遏物 阻遏物缺乏 dE/dt=（αμ+β）·X 0 dE/dt=αμ·X β dE/dt=（αμ+β）·X 0 dE/dt= β ·X α （4）滞后合成型（非生长偶联型） 酶生物合成模式 定义 图示 合成的调节 mRNA 解决方法 酶生长动力学方程 同步合成型 （生长偶联型） 延续合成型 （部分生长偶联型） 中期合成型 （特殊的生长偶联型） 滞后合成型 （非生长偶联型） 基质消耗动力学 用于细胞生长；用于产物生成；用于维持细胞生命活动 2.5 固定化微生物细胞及原生质体发酵产酶 固定化细胞：又称固定化活细胞或固定化增殖细胞，指采用各种方法固定在载体上，在一定的空间范围内进行生长、繁殖和新陈代谢的细胞。 一、固定化细胞发酵产酶的特点（P57） 提高产酶率 可以反复使用或连续使用较长时间 基因工程菌的质粒稳定，不易丢失 发酵稳定性好 缩短发酵周期，提高设备利用率 产品易于分离纯化 适用于胞外酶等胞外产物的生产 二、固定化细胞发酵产酶的工艺条件及其控制（P58） 1、固定化细胞的预培养 2、溶解氧的供给 3、温度的控制 4、培养基组分的控制 采用适合细胞生长的生长培养基和工艺条件，以利于固定在载体上的细胞生长繁殖。 必需增加溶解氧。 方法： 加大通气量； 改变固定化载体、固定化技术或培养基的配方等。 一般在培养液进入反应器之前预先调节至适宜温度。 控制影响固定化载体结构的物质含量。 适当降低培养基的浓度，以满足微生物对氧的需求。 三、固定化细胞生长和产酶动力学（自学，P59） 1、固定化细胞生长动力学 dx/dt=（dx/dt）g+ （dx/dt）f dx/dt=μg·xg+μf·xf dx/dt=μmg·S·xg/（Ksg+S）+μmf·S·xf/（Ksf+S） 2、固定化细胞产酶动力学 dE/dt= （αμ+β）Xf+γXg=εfXf+εgXg ε f = αμ+β——游离细胞比产酶速率 ε g ＝ γ——固定在载体上细胞的比产酶速率 3、固定化细胞连续产酶动力学 dx/