离子交换色谱1方案.ppt

离 子 交 换 色谱ion exchange chromatography 离子交换层析 离子交换层析的基本原理 离子交换介质分类 离子交换层析的基本操作 离子交换层析的应用 一、离子交换层析的基本原理 离子交换层析(IEC)是以离子交换剂为固定相，以含特定离子的溶液为流动相，利用离子交换剂上的可交换离子与溶液中离子发生交换作用，由于不同的溶质离子与离子交换剂上离子化的基团的亲和力和结合条件不同，洗脱液流过时，样品中的离子按结合力的弱强先后洗脱,而将混合物中不同离子进行分离的技术。 二、离子交换介质 离子交换剂亦称离子交换介质，为离子交换层析的的固定相。 根据材料的不同，离子交换剂分为： 一：聚苯乙烯型离子交换树脂。树脂骨架的多孔弹性颗粒. 二：多糖类骨架的离子交换树脂。如：离子 交换纤维素（DEAE-纤维素、CM-纤维素）离子交换葡聚糖 根据活性基团的不同、离子交换剂可分为 一：阳离子交换剂 强酸型和弱酸型 磺酸基（-SO3H） 磷酸基（-PO3H2） 羧酸基（-COOH） 酚羟基（-OH） 二：阴离子交换剂 强碱型和弱碱型 伯胺基（-NH2） 仲胺基（-NHCH3 ） 叔胺基（-N(CH3)2） 季胺基（-N+(CH3) 3 ） 三、离子交换柱的操作 1.交换树脂的选择 一般原则： 酸性物质用阴离子交换剂分离 碱性物质用阳离子交换剂分离 2.树脂预处理 去除杂质与细小颗粒：保证有较好的均匀度 3.平衡: 稀酸或稀碱处理，使交换剂带上需要的平衡离子。使之成为带H+或OH-，至所需的pH和离子强度。 4.装柱： 使用前要排除气泡。 5.加样与洗脱 (1)样品应与起始缓冲液有相同的PH和离子强度 (2)可通过改变溶液的pH或改变离子强度的方 法将结合物洗脱 最好的洗脱方法是连续梯度洗脱 6.洗脱液的收集 7.离子交换剂的再生与保存 (1)再生剂常用HCl、NaCl、NaOH、乙醇等。 (2)保存离子交换剂时要加防腐剂，如：氯已定（洗必泰），乙基硫柳汞（0.005％)，0.02％叠氮钠 8. 产品的浓缩、脱盐 离子交换层析得到的样品往往盐浓度较 高，而且体积较大，样品浓度较低。所以一般离子交换层析得到的样品要进行浓缩、脱盐处理。 以强酸性阳离子交换树脂分离K+和Na+为例： 交换 R- H+ + K+ = R- K+ + H+ R- H+ + Na+ = R- Na+ + H+ 洗脱 R- K++ H+=R- H+ + K+ R- Na+ + H+ =R- H+ + Na+ 纯水的制备 水质检测 分析化学应用，如干扰离子的分离、微量组分的富集 水溶性带电荷植物成分分离 蛋白质或酶的分离 四、离子色谱的应用 纯水的制备 氢型强酸性阳离子交换树脂，除去各种阳离子 2R-SO3H+Ca2+＝(R-SO3)2Ca+2H+ 氢氧型强碱性阴离子交换树脂，除去各种阴离子。 RN(CH3)3OH+C1-＝RN(CH3)3Cl+OH- 去离子水装置示意