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发酵法生产 L 谷氨酰胺研究进展?L-谷氨酰胺(L-glutamine, L-Gln)是 L-谷氨酸的γ - 羧基酰胺化的一种条件性必需氨基酸(图 1),相对分子质 量 146.15,熔点 185℃(分解),晶体呈白色斜方或粉末 状,结晶状态下稳定,无臭,稍有甜味,溶于水( 水 溶液呈酸性) ,等电点 5 . 6 5 ,几乎不溶于乙醇和乙醚. L-Gln 属中性氨基酸,在偏酸,偏碱及较高温度下易分 解成谷氨酸或环化为吡咯烷酮二羧酸.O H 2N C CH2 CH2 N H 3+ CH COO-L-Gln是人体血液中浓度最高(500～900 mol/L)的游 μ 离氨基酸,所占比例高达 61%.L-Gln 在肾脏是肾小管 泌氨作用的主要氮源,在肝脏是糖异生和尿素合成的原 料,在神经组织又是神经递质的前体物质,在血液中 有暂时解除氨毒的作用,现已普遍认为 L - G l n 是一种 条件性必需氨基酸. L-Gln 主要生理功能如下: 治疗胃肠溃疡[1].因外源 L-Gln 能促使胆汁分泌和 正常排粪,故 L-Gln 已用于临床治疗腹部溃疡,节段性 回肠炎和过敏性肠炎.如日本寿制药株式会社生产的 麦滋林 ,为 L - G l n / 萸磺酸钠颗粒剂,该胃药制剂 现已进入我国市场. 缓解运动综合症或运动疲劳[2].L-Gln可以调节蛋白 质合成,抑制蛋白质降解,糖原合成,细胞生长,激 活免疫,提高生长激素水平.让成年人喝下一瓶含有 2g L-Gln 的饮料,90min 内,其血液样品中生长激素最 高可增长 4 3 0 % .目前已大量用于治疗运动员的运动综 合症和高强度劳动或运动后的疲劳恢复. 调节机体免疫力[3-4].外源 L-Gln 会刺激免疫球蛋白 分 泌 ,促 进 免 疫 系 统 重 建 ,如 : 烧 伤 ,艾 滋 病 ,关 节炎等免疫系统的恢复. 增强脑神经机能[5] .L-Gln 可被用作中枢神经抑制 剂,在大脑中被转化成谷氨酸,与葡萄糖一起参与脑 代谢,以平衡脑内电流脉冲,有利于人脑的清醒和情 绪稳定,是少数几种能克服血脑屏障和参与大脑化学反 应的物质之一,被称为大脑燃料 . L-Gln 在癌症治疗上的潜在价值[6], 减少癌症治疗中 化疗和放疗的副作用. 1 L- 谷氨酰胺的生产方法 由于 L-Gln 重要的生理功能和临床治疗作用,如何 实现 L-Gln 的工业化生产越来越受到关注.L-Gln 的生产 方法主要有化学合成法,酶促合成法和发酵法. 1.1 化学合成法经 L-Gln 合成酶(GS)催化而成,如图 3 所示. 与化学合成法相比,酶促合成法反应步骤相对简 单,其中三磷酸腺苷( A T P ) 是必需的.A T P 价格昂贵, 同时酶促反应底物 NH 4 + ,副产品二磷酸腺苷(ADP)都明 显抑制 L-Gln 的生成,因此该生产方法不能满足大规模 工业化生产的需要. 1.3 发酵法 发酵法是目前最常用的 L-Gln 生产方法,具有原料来源广泛,生产成本低,产品质量可控,产物单一等 优点,适宜于大规模工业化生产.1 9 6 1 年,T s u n o d a 等[ 7 ] 首先发现除了谷氨酸以外,在谷氨酸发酵液中还 有 L-Gln;1963 年,Oshima 等[8] 通过改变谷氨酸微球菌 的发酵条件使谷氨酸发酵转向 L-Gln 发酵;七十年代, Nakanishi 等[9-11]进一步证实了,改变发酵条件可以使谷 氨酸产生菌从谷氨酸发酵转向 L - G l n 发酵.八十年代 后,我国在实验室小试或中试规模中进行了 L-Gln 发酵 法生产,但是 L-Gln 产量低[12-13] ,至今未能进行大规模 工业化生产. 本文对发酵法生产 L-Gln 的关键技术环节(如菌种选 育,发酵工艺和分离纯化) 的研究进展进行综述,并详 细阐述L-Gln生物合成代谢调控和新型过滤及其藕联技术 在下游分离纯化过程中的应用. 2 2.1 发酵法生产 L- 谷氨酰胺 菌种选育 L-Gln 生产菌种主要来自谷氨酸生产菌,如棒杆菌C H 3O H CS2 NH3 C 5 H 9 NO 4 (Glu)—————→ C 6 H 11 NO 4 —————→ C 7 H 20 N 4 O 4 S 2 —————→ H 2S O 4 NH3 HOAC C 7 H 18 N 4O 3 S 2 ————→ C 5 H 10 N 2 O 3 (L-Gln) C H 3O H N H 2N H 2 Raney 镍 C 5 H 9 NO 4 (Glu)—————→ C 6 H 11 NO 4 —————→ C 6 H 13 N 3 O 3 —————→ H 2S O 4 C6H 10 N2O 3(L-Gln) 图 2 化学法合成 L-Gln 流程图 Fi