化教1101班陈晓关于三聚氰胺检测方法的解剖.doc

关于三聚氰胺检测方法综述 摘；；Melamine）化学式C3H6N6俗称密胺、蛋白精，是一种用途广泛的基本有机化工中间产品。它是白色单斜晶体，几乎无味，微溶于水（3.1g/ L 常温），对身体有害，不可用于食品加工或食品添加物。 二．测定方法 1.高效液相色谱法测定乳制品中的三聚氰胺 三聚氰胺( melamine) 是一种重要的氮杂环有机化工原料，广泛用于木材加工、塑料、造纸、纺织、皮革、电气和医药等行业，在部分亚洲国家被用以制造化肥［1，2］。三聚氰胺能诱发婴幼儿肾衰竭并导致死亡，是一种禁止用于食品及动物饲料中的化学物质［3］。但是，由于三聚氰胺中含氮量高达66%，比氨基酸中氮含量高3 －4 倍，向奶粉中违规添加三聚氰胺可虚假提高蛋白质含量，降低生产成本，但对人体健康构成重大威胁［4，5］。国家标准GB/T 22388 －2008 中规定了原料乳、乳制品以及含乳制品中三聚氰胺的三种测定方法，即高效液相色谱法( HPLC) 、液相色谱－ 质谱/质谱法( LC －MS /MS) 。相色谱－ 质谱/质谱法( GC － MS /MS) ］。高效液相色谱法的定量限为2mg /kg，液相色谱－ 质谱/质谱法的定量限为0．01mg /kg，气相色谱－ 质谱法的定量限为0． 05 mg /kg( 其中气相色谱－ 质谱/质谱法的定量限为0．005mg /kg) ［6］。袁光等采用的方法是在国家标准GB/T 22388 － 2008 中高效液相色谱法( HPLC) 的基础上进行改进，对市售乳制品中三聚氰胺含量进行定性和定量分析，具有操作简单、灵敏度高，测定速度快等优点。 2.1仪器与方法 2.1.1 仪器与试剂 仪器 高效液相色谱( HPLC) 仪: 日本岛津LC － 10AT高效液相色谱仪，具体配置为LC － 10ATvp 溶剂输送泵，Rheodyne 7725i 手动进样阀，SPD － 10Avp 紫外光度检测器，N2000 色谱工作站; 万分之一分析天平: 上海精科实业有限公司，精确到0． 1mg; 超声波清洗器; 超纯水机; 固相萃取装置; 氮气吹干仪。 试剂与材料 甲醇: 色谱纯; 乙腈: 色谱纯; 氨水: 浓度为25%～ 28%; 氨水甲醇溶液: 量取5mL 氨水，溶解于100mL 甲醇中; 三氯乙酸溶液10g /L: 称取10g 三氯乙酸加水至1000mL; 乙酸铅溶液22g /L: 取22g 乙酸铅用约300mL 水溶解后定容至1L; 甲醇溶液:200mL 甲醇加入800mL 超纯水，混匀。离子对试剂缓冲液: 准确称取2． 02g 庚烷磺酸钠和2． 10g 柠檬酸于1L 容量瓶中，加入950mL 水溶解，将pH 值调至3． 0，定容至1L。三聚氰胺标准储备液: 称取 ( 精确到0． 1mg) 的三聚氰胺标准品于100 mL 容量瓶中，用甲醇溶液溶解并定容至刻度，该溶液浓度为1 mg /mL，于4℃避光保存。混合型阳离子交换固相萃取柱: 60mg，3mL; 定性滤纸; 滤膜: 0． 45um，有机相; 氮气: 纯度≥99．999%。 2.1 2 .方法 乳制品的前处理 2.1 2.2 净化 分别用3mL 甲醇和3mL 水活化混合型阳离子交换固相萃取柱后，将净化液转移至混合型阳离子交换固定相萃取柱中。固相萃取过程流速小于1mL/min。再用3mL 水和3mL 甲醇洗涤混合型阳离子交换固相萃取柱，抽至近干后用氨水甲醇溶液3mL 洗脱。洗脱液50℃下用氮气吹干，残留物用1mL 流动相定容，漩涡振荡1min，过0． 45um 微孔过滤莫后注入样品瓶中，进高效液相色谱测定。 2.1 2.2 高效液相色谱( HPLC) 条件 色谱柱: ODS － SP C18 柱， 250 mm × 4． 6 mm( i． d． ) ，5Um，或相当者; 流动相: 离子对试剂缓冲液 ( 85∶ 15，体积比) ，混匀; 流速: 1． 0 mL/min; 检测波长: 242nm; 柱温: 35℃; 进样量: 20μL。 2.1 2,3 三聚氰胺标准溶液的配制 用流动相将三聚氰胺标准储备液逐级稀释得到的浓度为1． 0、5． 0、10． 0、25． 0、50． 0μg /mL 的标准工作液，并用0． 45μm 微孔滤膜过滤后注入样品瓶中用于色谱测定。 2.1 2.4结果计算 2.1 3 结果与分析 配制三聚氰胺标准工作液，五个浓度点， 由低到高进样检测的标准品色谱图见。以峰面积－ 浓度作图，得到标准曲线及回归方程 ，相关系数R 为0． 9997，因此三聚氰胺溶液在质量浓度为1． 0 ～ 50． 0μg /mL 范围内呈线性关系。以上为高效液相色谱测定乳制品的方法 2，基于反相液相色谱-质谱联用的高灵敏度三聚氰胺检测新方法 2007 年4