高一生物物细胞培养和核移植技术 人教实验版.docVIP

高一生物物细胞培养和核移植技术 人教实验版 【本讲教育信息】 一. 教学内容： 动物细胞培养和核移植技术 二. 学习内容： 本讲学习动物细胞培养的过程，要区别开较动物细胞培养与植物组织培养异同点，掌握动物体细胞核移植技术的过程和意义 三. 学习重点、难点 了解动物细胞培养的过程。 了解动物体细胞核移植技术的原理。 四. 学习过程： （一）学习内容 1. 动物细胞培养：胞培养是指细胞在体外条件下的生长，动物细胞在培养的过程中不再形成组织。概念：从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。培养液的成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。动物细胞培养成功的关键在于培养液中是否含有动物血清，因为由于动物细胞生活的内环境还有一些成分尚未研究清楚，所以需要加入动物血清以提供一个类似生物体内的环境，此外动物血清中也包含了一些动物的激素和酶，可以促进细胞的发育。培养液的特点：液体培养基、含动物血清。培养的条件：无菌、无毒的环境；营养物质（合成培养基）；温度和pH（36.5±0.5，7.2~7.4）；气体环境（氧气和二氧化碳）等。基本过程：取动物胚胎或幼龄动物器官、组织。将材料剪碎，并用胰蛋白酶处理（消化），处理形成单个细胞，将单个的细胞放入培养基中配成一定浓度的细胞悬浮液。悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，成为细胞贴壁。当贴壁细胞分裂生长到互相接触时，细胞就会停止分裂增殖，出现接触抑制。此时需要将出现接触抑制的细胞重新使用胰蛋白酶处理。再配成一定浓度的细胞悬浮液。我们将培养10代以内的培养称为原代培养。10代以后的称为传代培养。培养10~50代的细胞称为细胞株。当培养超过50代时，大多数的细胞已经衰老死亡，但仍有部分细胞发生了遗传物质的改变出现了无限传代的特性，即癌变。此时的细胞被称为细胞系。 技术的应用：a.生物制品的生产b.转基因动物的培养c.检测有毒物质d.医学研究区别：a. 培养基不同：植物细胞（固体培养基），动物细胞（液体培养基）b. 培养基的成分不同：动物细胞培养必须利用动物血清，植物组织培养则不需要。c. 产物不同：植物组织培养最后一般得到新的植物个体，而动物细胞培养因为动物体细胞一般不能表达其全能性，因此得到的是同一种的细胞。细胞核移植将供体细胞核移入除去核的卵母细胞中，使后者不经过精子穿透等有性过程即无性繁殖即可被激活、分裂并发育成新个体，使得核供体的基因得到完全复制。以供体核的来源不同可分为胚细胞核移植与体细胞核移植两种。 哺乳动物核移植是将外源的一个细胞核与一个去核卵母细胞结合，产生遗传上同质的动物的技术。它在动物育种、制备转基因动物、基因治疗及器官移植等方面具有重大的作用。供体核的获得供体核可以是早期胚胎细胞、胚胎千细胞和体细胞。早期都采用合子核到64细胞期的胚胎细胞核质体分裂球作供体细胞核80年代开始，胚胎干细胞在核移植，但建系太困难，仅在小鼠上获得成功。胚胎干细胞系克隆小鼠，有29％的重构胚在体外能发育到囊胚阶段，移植给假孕小鼠有8％胚胎附植并产下小鼠。1997年Dolly羊的出现，开始了体细胞的核移植，并发展很快。胚细胞用0.2％链霉蛋白酶预处理胚胎，溶去胚胎的胶膜及透明带，分离出单个卵裂球。消化透明带的时间是影响卵裂球质量的重要因素，作用时间短，透明带不能充分消化，卵裂球不易获得；作用时间长，则影响到卵质膜，容易破裂，在操作时容易失败。因此，在分离卵裂球时应在解剖镜下监视透明带的消化过程，当透明带变薄，膨胀适度时就应移出，再用适当口径的吸管吹打使之分离。另外，苏格兰学者Campbell等显微分离胚盘细胞并在体外进行缺血饥饿传代培养，诱使细胞处于静止状态，以便调整染色体结构，从而有助于核的重组与发育，他们使用这种方法建立了绵羊TNT4细胞系，该细胞形态类似于胚胎干细胞，但更扁平、上皮化。体细胞最早用青蛙肠粘膜上皮细胞获得了后代。Wilmut等用绵羊乳腺细胞获得Dolly羊。美国夏威夷大学Ryuzo Yanagimachi教授领导的一个国际科研小组于1998年以小鼠卵丘细胞为核供体，采用吸移管注入，利用机械和化学激活方式进行细胞的融合，成功培育三代克隆小鼠。对小鼠、牛体细胞移植的相关研究中发现休眠G0）的颗粒细胞核与去核M期卵母细胞构成的体细胞重构胚，其发育率及产生克隆后代的能力远高于其它类型的休眠体细胞，这可能缘于颗粒细胞上存在着与卵母细胞紧密联系的胞质微绒毛桥的缘故，它或许有助于供体核同受体核胞质因子的交换。?受体细胞的获得及其去核作为细胞核移植的受体细胞主要有三类：去核的卵母细胞、受精卵和2-细胞胚胎，其中卵母细胞应用最为广泛。近来有人用两个去核卵母细胞融合后产生的胞质作为受体进行各代核移植，以增加核移植胚胎的细胞数和提高继代