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酶对固定化底物的作用 无机化学 张春丽 111102009 如何用新的方法来监测酶对固定化底物的作用 酶的可接近性 酶的动力学，热力学性质 总结 二新方法来监测酶对固定化底物的作用 双光子显微镜 荧光显微镜 共焦拉曼显微镜 石英单晶微量天平 基质辅助激光解吸飞行时间质谱法 应用双光子显微镜的实例一 应用双光子显微镜的实例二 应用石英单晶微量天平的实例 三、酶在固相载体上的可接近性、热力学及动力学性质 四、总结 目前，已经有新方法来监测酶对固定化底物的作用，但需要提供一系列适合酶在固相反应。我们可以进一步改善来提供更方便，简单方法来监测空间分辨率和实时操作。 进一步探讨研究酶在固相载体上的可接近性，热力学及动力学性质，有利于更好地了解这些系统。 * * 简介 丹磺酰氯(二甲氨基萘磺酰氯)是一种强荧光剂，可用于测定肽链的氨基末端，它能专一地与链N-端α-氨基反应生成丹磺酰-肽，后者水解生成的丹磺酰-氨基酸具有很强的荧光 以香豆素为底物，在固相上发生酶促反应； 荧光基团 它是双香豆素衍生物，含有羧基用来固定在玻璃的表面和给电子基团（酚类或苯胺集团）作为与酶的结合部位。 酶识别头包含一个独特的化学结构，作为酶的结合部位，不同的靶酶可做微调。 应用微阵列技术（是一种将核酸序列纵横排列成序，样品在固相载体上以便核酸分子杂交，结合在芯片上的不同点），通过TMP观测其荧光强弱，来鉴别酶的种类、专一性及活性。 石英晶体微天平实时监测固定底物的量。这种方法非常敏感对于测量质量的增加和减少，可精确到在纳克水平。 首先加入的是糖原磷酸化酶，它与固定在固相物上的支链淀粉结合，导致大规模的增加。 随后加入磷酸腺苷，激活磷酸酶，开始逐步 催化溶解的淀粉、使质量大量减少。 分别在PEGA聚合物和水溶液中，嗜热菌蛋白酶催化合成缩氨多肽 。即向苯丙氨酸中加入饱和溶液Ph=7.4的N-（9-芴甲氧羰基）甘氨酸Fmoc-Gly，在酶催下作用观察其平衡转化率如图所示。（疏水效应） 固相载体对酶催化反应的平衡位置的影响 *