发酵工程5.ppt

第一节 常用的灭菌方法与原理 原理：药物与微生物细胞中的成分反应，使蛋 白质变性酶失活。 使用范围：器皿、双手和实验室、无菌室的环 境灭菌， 不能用于培养基灭菌 常用的灭菌剂 （二） 辐射灭菌 原理：利用高能量的电磁辐射与菌体核酸的光化学反应造成菌体死亡。 常用：紫外线、X射线和γ射线。 使用范围：用于室内空气及器皿表面灭菌 （三） 干热灭菌 原理：利用高温对微生物有氧化、蛋白质变性和电解质浓缩作用而杀灭微生物。 常用方法：灼烧和电热箱加热，140-180℃ 1-2小时 使用范围：玻璃及金属用具及沙土管灭菌 （四）湿热灭菌 原理：蒸汽冷凝放出大量潜热，具有穿透力，且在高温有水分条件下，蛋白质易变性。 常用方法： 水煮常压灭菌：100℃ 饱和蒸汽灭菌：一般121℃，30min 使用范围：培养基和发酵设备灭菌。 （五）过滤除菌 原理：利用微生物不能透过滤膜除菌。 方法: 0.01~0.45 ?m孔径滤膜， 使用范围：用于压缩空气、酶溶液及其他不耐热化合物溶液除菌。 二 、 湿热灭菌原理 （一）生物热死动力学（对数残存定律） dN / dt =- K N N：菌体个数（个） t : 灭菌时间（min） k：反应速度常数（min-1） dN / dt: 菌受热死亡速率(个/min) （二）反应速率常数K 如何通过实验根据对数残存定律确定某一温度,某一微生物的K ？ 1. K 与菌种的特性有关 相同温度下，微生物越耐热， k值越小； 相同温度下，微生物越不耐热，k值越大。 2. K 与灭菌温度有关 K=A e –E / RT （阿累尼乌斯方程） Ln K =Ln A- E/ RT A：比例常数 R：气体常数(J/ mol K) T：绝对温度( K) △E：杀死细菌所需的活化能（J/ mol） 二、培养基灭菌工艺 （一）培养基灭菌时间的选择 t =1/ k * Ln( N0/ N) 其中 K：一般耐热的细菌芽孢的K值 N0 ：细菌及芽孢数之和 N：10 -3 （二）培养基灭菌温度的选择选择即能达到灭菌要求，又保证营养成分不被破坏的温度 1.培养基营养成分破坏动力学方程 -dC/dt = K’ C Ln (C/ C0 ) = - K t -dC/dt :营养物降解速度 mol / L h C: 营养物浓度 mol / L K’ : 营养物降解反应速度常数 1 / s t ：时间( S ) 2. 根据实验结果灭菌活化能大于培养基破坏活化能 E＞ E’ 3. 当温度升高时微生物死亡速度常数比营养物质降解速度常数变化得大 4. 达到相同灭菌效果，T越高，K越大，所需t 越短，采用高温短时（HTST）灭菌效果好 （ 三） 影响灭菌效果的因素 微生物种类：不同的微生物k值不同。 初始菌量：在保持N值不变的前提下，t 与初始菌量N0的对数成正比。 培养基成份：油脂、蛋白质增加微生物的耐热性。 传热与混合状况：影响受热均匀度。 培养基中固体颗粒的存在影响热穿透。 蒸汽中空气的存在降低蒸汽分压和灭菌温度。 pH：酸性pH下可加快微生物热死速率。 第二节 培养基灭菌工艺 一、分批灭菌(batch sterilization) 二、连续灭菌(continuous sterilization) 一 分批灭菌(batch sterilization) （一）定义： 将配制好的培养基输入发酵罐中，用蒸汽加热，使培养基和设备同时灭菌的一种灭菌方式。 （二）操作过程： 空罐准备：清洗、检修和检测。 升温：把培养基加热到灭菌所需的温度。 保温维持：在灭菌温度下保持灭菌所需时间。 冷却保压：把培养基的温度降低到接种的温度。 温度随灭菌时间的变化 三路进汽：直接蒸汽从通风、取样和出料口进入罐内直接加热，直到所规定的温度，并维持一定的时间。这就是所谓的“三路进气”。 二、连续灭菌(continuous sterilization) 定义：将培养基通过专门设计的灭菌器，进行连续流动灭菌后，进入预先灭过菌的发酵罐中的灭菌方式。 流程： （一）由热交换器组成的灭菌系统 （二）蒸汽直接喷射型的连续灭菌系统 （三）由连消塔、维持罐和喷淋冷却组成的灭菌系统 由热交换器组成的灭菌系统工艺流程图 温度随时间的变化 蒸汽直接喷射型的连续灭菌系统 温度随灭菌时间的