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22.人组织纤溶酶原激活物(htPA)是一种重要的药用蛋白,可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。流程如下:
(1)htPA基因与载体用_________切割后,通过DNA连接酶连接,以构建重组表达载体。检测目的基因是否已插入受体细胞DNA,可采用_________技术。(2)为获取更多的卵(母)细胞,要对供体母羊注射促性腺激素,使其__________。采集的精子需要经过__________,才具备受精能力。(3)将重组表达载体导入受精卵常用的方法是__________。为了获得母羊,移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行__________。利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体,这体现了早期胚胎细胞的__________。
(4若在转ht-PA基因母羊的羊乳中检测到_________,说明目的基因成功表达。
(15分)
(1)自然状况下的胚胎干细胞是由哺乳动物的早期胚胎或 中分离出来的一类细胞。
(2)上述过程中要应用到的动物细胞工程技术有 、 。胚胎干细胞在形态上表现为体积小,细胞核大, 明显,在功能上具有 。
(3)将胚胎干细胞用于检测有毒物质是否引起了基因突变,在分子水平上需要采用 技术。
(4)若选用囊胚进行胚胎分割,要注意对其 做到均等分割。
(5)胚胎移植是否成功,与供体和受体的生理状况有关。在胚胎移植操作中,应对供体和受体母畜进行 处理才能使胚胎在移植前后所处的生理环境保持一致。
24.【生物——选修3现代生物科技专题】(15分)
科学家采用不同方法培育良种牛的过程.请据图回答有关问题:
(1)与一般的繁育良种动物方式相比较,胚胎移植的优势是???????? ???? 。为提高良种奶牛的繁殖能力,在获取卵母细胞之前需用促性腺激素对奶牛进行处理,目的是 。
(2)“转基因牛D”培育过程中,常用受精卵作为外源基因的受体细胞,主要原因是 。
(3)图中数字标号代表的结构为 ,将来发育为 ,c→d过程需对其均等分割的目的是 。A、B牛基因型是否相同? 。
(4)在培育良种牛的过程中,都运用了动物细胞培养技术.在动物细胞培养过程中,为防止杂菌的污染而要加入一定量的 。
[生物-现代生物科技专题]必答题(10分)
Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图:
(1)步骤①中,在核移植前应去除卵母细胞的 。
(2)步骤②中,重组胚胎培养到 期时,可从其内细胞团分离出ES细胞。
(3)步骤③中,需要构建含有基因Rag2的表达载体。可以根据Rag2基因的 设计引物,利用PCR技术扩增Rag2基因片段。用HindIII和PstI限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体,所选择的表达载体上应具有 酶的酶切位点。
(4)为检测Rag2基因的表达情况,可提取治疗后小鼠骨髓细胞的 ,用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验。
30.嗜热土壤芽胞杆菌产生的β-葡萄糖苷酶(BglB)是一种耐热纤维素酶,为使其在工业生产中更好地应用,开展了以下试验:
Ⅰ.利用大肠杆菌表达BglB酶
PCR扩增bglB基因时,选用 基因组DNA作模板。
右图为质粒限制酶酶切图谱。bglB基因不含图中限制酶识别序列。为使PCR扩增的bglB基因重组进该质粒,扩增的bglB基因两端需分别引入 和 不同限制酶的识
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