板蓝根对小鼠实验性肝损伤的保护作用及机制.docVIP

板蓝根对小鼠实验性肝损伤的保护作用及机制 左艳君1 ，吕秀阳1 ，王孜博1 ，刘娇娇1 （1. 河南科技大学医学技术与工程学院，河南，洛阳，471003） 摘要: 目的 探讨四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤模型的建立以及板蓝根对肝脏保护作用和机制。方法 腹腔注射1ml/L的CCl4花生油溶液10 ml/kg建立急性CCl4小鼠肝损伤模型，测定血清中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST），肝组织中超氧化物岐化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的水平，并进行肝脏病理学检查。结果 板蓝根可明显降低肝损伤小鼠血清中ALT、AST，降低肝组织中MDA的含量水平(P0.01)，升高肝组织中SOD的活性(P0.01)，肝脏病理学检查表明板蓝根可减轻肝组织病理损伤程度。结论 板蓝根对CCl4诱导的急性肝损伤具有明显的保护作用。 关键词：板蓝根；CCl4；肝损伤；小鼠 板蓝根为十字花科菘蓝属, 具有抗菌抗病毒、清热解毒、凉血消肿、利咽之功效。。《辽宁常用中草药手册》记载，板蓝根可用于治疗肝炎、肝硬化等症。本文针对板蓝根对急性肝损伤的保护作用进行实验研究，采用CCl4 中毒诱导小鼠急性肝损伤模型，观察肝组织病理学变化、血清ALT、AST及肝组织MDA、SOD含量以及相关的病理变化，探究板蓝根对实验性肝损伤的保护及影响，并探讨其可能的作用机制，为其临床治疗肝损伤提供实验依据。 1 材料与方法 1.1 实验材料 1.1.1 实验动物 健康昆明种小鼠40只，雌雄兼用，体重(20 ±2) g，由本校实验动物中心提供。 1.1.2 药品及试剂 板蓝根（成都三明药物研究所）；CCl4，分析纯(上海长江化工厂)；ALT、AST试剂盒由 Olympus 公司提供；MDA 测定试剂盒(硫代巴比妥酸比色法) 、SOD 测定试剂盒(黄嘌呤氧化法) (南京建成生物工程研究所提供)。 1.1.3 主要仪器 721 型分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)，TGL-16C 型高速离心机，TDL-4 型低速台式离心机(上海安亭科学仪器厂)，电热恒温水温箱(上海医疗器械七厂)等。 1.2 试验方法 健康昆明种小鼠40只随机分为4组：每组10只，I组为生理盐水组，II组为CCl4 模型组，III组为给药低剂量组，IV组为给药高剂量组，小鼠在实验室观察1d后进行实验。I、II两组小鼠每天均用腹腔注射生理盐水10ml/ kg，III组小鼠每天腹腔注射低剂量板蓝根液20ml/kg，IV组小鼠每天腹腔注射高剂量板蓝根液80ml/ kg。每天给药一次，共10d。末次给药后2h，各组小鼠(生理盐水组除外)，其余各组均腹腔注射1ml/L的CCl4花生油溶液10ml/kg一次。禁食不禁水16h后各组小鼠快速断头取血收集血清；并立即处死小鼠，剖腹，取小鼠的肝脏，称重，部分肝组织制备肝匀浆液及肝组织切片。 1. 3 样品采集及检测方法 1.3.1 血清ALT、AST活性的检测　取小鼠血，以16 000r/ min 离心7min，分离血清，按试剂盒说明书操作，采用全自动生化分析仪及其配套试剂检测血清中ALT和AST的浓度。 1.3.2 血清、肝组织SOD、MDA含量的检测　各组小鼠血清收集方法同上。剖腹取各组小鼠肝组织称重，置玻璃匀浆器中磨碎，加冰冷的0. 86 %NaCl 溶液制成10%肝匀浆液，以4 000r/ min离心10min，取上清液检测。严格按照试剂盒说明书操作，然后用721型分光光度计比色检测小鼠肝匀浆中SOD和MDA的浓度。 1.3.3 病理肝组织切片制备及组织学观察 各组小鼠处死立即剖腹取相同部位的肝脏用10%甲醛液固定，乙醇梯度脱水，采用常规石腊切片，切片厚5μm，HE染色，镜下做病理组织学观察。肝损伤程度分级标准：在1个肝小叶中，( + ) 表示只有几个细胞发生相应的病理改变，分布散在；( ++ ) 表示一半左右细胞发生相应的病理改变，分布较广；( +++ ) 表示绝大多数细胞发生相应的病理改变，分布弥漫；( - ) 表示未发生相应的病理改变。 1.4 统计学处理 实验数据均以均数±标准差(χ ±S ) 表示，采用双侧t 检验进行统计处理。 2 　结果 2. 1 板蓝根对CCl4 肝损伤小鼠肝脏组织学的影响 见表1。由表1可知，与生理盐水组相比，CCl4模型组出现肝细胞弥漫性变性、坏死，炎性细胞浸润为特点的急性肝损伤表现；与模型组相比，给药低剂量组和高剂量组病理改变明显减轻，提示板蓝根对CCl4中毒导致的小鼠肝细胞损伤有明显保护作用。各组小鼠肝组织病理学结构见图-1、2、3、4。 表1 板蓝根对CCl4 肝损伤小鼠肝脏组织学的影响 组别 小数数 量（只） 剂量 （10mg/kg） 不同等级肝细胞病理改变的小鼠数量（只） 空泡变性 肝细胞坏死 炎性细胞浸润