血型分子诊断技术进展与应用.pptVIP

血型分子诊断技术进展与应用 主要内容 红细胞血型系统分子诊断 红细胞血型系统分子基础 ABO血型系统 Rh血型系统 H血型系统(类孟买型) 红细胞血型系统分子诊断技术及其应用 小结 有关分子生物学概念 点突变 同义突变 无义突变 有义突变 起始密码突变 缺失 插入 重排 有关分子生物学概念 基因结构异常或表达异常 点突变 插入 缺失 易位和重排 拷贝数扩增 DNA多态性 基因的检测 常见突变示意图 ATG CGG TAG CGT AGT CTG ATG CGA TAG CGT AGT CTG ATA CGG TAG CGT AGT CTG ATG CGGG TAG CGT AGT CTG ATG CG TAG CGT AGT CTG 新等位基因形成 红细胞血型系统 40个基因 1250个等位基因(截止2012年5月12日) 参见Blood Group Antigen Gene Mutation Database 红细胞血型分子机制 点突变 同义突变、无义突变、 有义突变、起始密码突变、拼接接受位点 插入 缺失 基因重组（RHD/RHCE） 基因部分重复 /projects/gv/mhc/xslcgi.cgi?cmd=bgmut/systems ABO血型分子生物学研究 1990年Yamamoto等首次克隆 基因定位于染色体9q34 ABO基因cDNA，其分子量为41,000 Dalton，DNA长度为1062bp ABO血型系统为三复等位基因，有A、B、O三个基因 ABO基因包括7个外显子，长度大于18kb 大多数编码序列位于第6和7外显子 ABO基因示意图 常见等位基因 A和B基因 编码的蛋白都是353个氨基酸，O基因编码的蛋白只有 115个氨基酸 A101、A102、B101、O01、O02 A101作为参考序列 A102等位基因 C467T(Pro-Leu) B101基因在297、526、657、703、796、803、930、1096位有8个核苷酸与A101基因不同 但只有526、703、796、803四个核苷酸的变化造成了氨基酸序列的变化（A101依次是精氨酸、甘氨酸、亮氨酸和甘氨酸，B101依次是甘氨酸、丝氨酸、蛋氨酸和丙氨酸） O01基因在261位的G缺失,提前终止 ABO亚型频率分布 ABO血型中存在ABO亚型 临床输血和献血者检测中常见 440617份 A亚型22份 AxB 11例，AelB 3例，Ax 3例，Ael 2例，Amh 2例，A3 1例 B亚型41份 Bx11例，B39例，ABx7例，AB3 5例，Bel3例，Bm 2例，ABel 1例，ABend 1例，ABm 1例，Bend 1例。 B(A)1例 CisAB2例 A2 14例 A2B 35例 引自中国输血杂志2006，19（1）：25 ABO亚型的分子研究 通过检测261、526、703、796、803位的核苷酸可以确认大多数典型的ABO血型的基因型 近年来对血清学分类的ABO血型亚型抗原，应用PCR、DNA测序等技术，在核苷酸和酶蛋白氨基酸序列水平上进行研究 结果表明：原为同一亚型的抗原存在异质性，即血清学上同一亚型，在核苷酸和酶蛋白氨基酸序列水平上有可能存在差异。 几个位点以外的核苷酸变化引起的ABO血型亚型常会引起检测结果的偏差 发现的等位基因数为290个（2012年05月22日） A等位基因 可简要分为7大类等位基因 A1、A2、A3、Ax、Ael、Aw、Am A101等位基因序列作为参照标准 A102(C467T)（在中国人群中比例大于A101) A103(C467T,C564T) A104(A297G) A105(A297G,B-O1重组) A106(B-O02重组) A205(A1009G ) B等位基因型 可简要分为5大类等位基因 B1、B3、Bx、Bel、Bw B等位基因中297、703、796、803位基本恒定 B101-B118 B101:A297G;C526G;C657T;G703A;C796A;G803C;G930A;G1096A B301-B308 B301:A297G,C526G,C657T,G703A,C796A, G803C, G930A, G1096A, C1054T O等位基因 O01－O74 大多数261nt缺失，13个261nt不缺失 O01:261delG O02:261delG、T646A、G681T、C771T、G829A 人群中常见 003:261G、A297G,C526G,G802A O50 CisAB和B(A)等位基因 CisAB01-06 CisAB01:C467T,G803C CisAB02:C526G,C657T,G703A,G803C, B(A)01-06 B(A)型