白胡椒总生物碱的体外抗肿瘤作用研究.docVIP

白胡椒总生物碱的体外抗肿瘤作用研究 　　摘要：目的 研究白胡椒总生物碱对体外培养的肿瘤细胞株生长与集落形成的抑制影响。方法 白胡椒总生物碱用80%的乙醇进行索氏提取，再用大孔树脂进行纯化，用三氯甲烷萃取得到。采用四甲基噻唑蓝（MTT）法和细胞集落计数法检测生物碱对体外培养的SWWC116癌细胞、NCI-446癌细胞和Hela癌细胞的集落形成与生长的抑制作用。结果 白胡椒总生物碱显著抑制了SWWC116细胞和Hela细胞的集落形成和生长，抑制生长的IC50值分别为1.8mg/L和10mg/L，抑制集落形成的IC50值分别为0.3mg/L和0.9mg/L。而对NCI-446细胞的集落形成和生长无显著性抑制。结论 白胡椒生物碱对体外培养的两种癌细胞具有显著的抑制作用。 　　关键词：白胡椒；总生物碱；集落形成法；MTT法 　　中图分类号：R285.5 文献标识码：B 　　Abstract：Objective To test the antitumor activity of alkaloids from white pepper on NCI-446， SWWC116， Hela tumor cells in vitro. Methods In vitro study on the pharmacological activity of alkaloids from white pepper were performed by using MTT assay and Colony-forming assay. Results The result showed that alkaloids from White pepper had inhibition activity against Hela and SWWC116 tumor cell etc. Conclusion Alkaloids from white pepper has antitumor activity. 　　Key words：White pepper；Antitumer activitiey；Aalkaloids 　　白胡椒为胡椒科植物胡椒（Piper nigrum L）的成熟的果实。原产地为东南亚，在我国得主要产区在海南省，是海南省的特色农产品之一[1]。在华南地区、云南省和台湾省也有栽培。白胡椒为药食两用植物。在食品领域，白胡椒是优良的调味剂，还具有食品天然防腐剂的作用，被广泛用作腌制品的防腐性香料。在医药领域，白胡椒具有调热、健胃、利尿及支气管黏膜刺激等作用，可治疗消化不良、积食、寒痰、肠炎、感冒、支气管炎和风湿病等[2]。最近的研究表明，白胡椒在抗炎、抗惊厥、杀虫镇痛、镇静、和抗癌等多方面存在活性[3，4]。为了探讨白胡椒生物碱的抗癌作用，本实验对白胡椒总生物碱进行体外抗肿瘤研究。现将研究结果报道如下。 　　1 材料与方法 　　1.1材料 实验用白胡椒产地海南。人大肠癌细胞SWWC116、人肺腺癌细胞NCI-446和人宫颈癌细胞Hela均由吉林省肿瘤医院提供。 　　1.2试剂与仪器 MTT试剂由德国Sigma公司提供；胚胎牛血清（FBS）由杭州四季青生物工程材料有限公司提供；胰蛋白酶由天津市景洋生物制品有限责任公司提供；RPMI-1640培养基由美国GIBCO公司提供；二甲基亚砜（DMSO）、乙醇、三氯甲烷等均为国产分析纯试剂。D106型大孔吸附性树脂为工业品。 　　FZ102型微型植物粉碎机，主要仪器设备有MP2002型电子分析天平，KQ3200V型超声波清洗器，SHZ-D型循环水多用真空泵，RE-52型旋转蒸发仪，752型紫外分光光度计，SHELLAB型CO2培养箱，BIOCELL酶标仪，OLYMPUS倒置显微镜等。 　　1.3生物碱的提取分离方法[5] 将白胡椒粉碎，过100目筛。称取10 g于1000mL圆底烧瓶中，加90%乙醇200ml，在90℃回流提取2h，抽滤后收集滤液。残渣加入150ml 80%乙醇重复提取1次，过滤后弃去残渣，合并2次滤液，用D106大孔吸附树脂吸附，60%乙醇洗脱（流速2～3ml/s）。用旋转蒸发器回收洗脱液中的乙醇，浓缩至50ml，加0.5% 盐酸调pH至2～3后抽滤。滤液用1倍体积的三氯甲烷萃取2次，弃去三氯甲烷层，合并水层。加0.5%的NaOH调pH至7左右，抽滤后除去鞣质，继续加0.5%的NaOH调pH至9～11，用100ml三氯甲烷萃取3次，弃去水层，合并三氯甲烷相。回收得到的三氯甲烷部分经浓缩，真空干燥，备用。 　　1.4肿瘤细胞的培养方法[6] 取-15℃冷冻保存的3种癌细胞于37℃水浴中解冻，加培养液稀释后，1000r/min的速度离心5分钟，接种于500ml细胞培养瓶