组织因子途径抑制物―2在正常宫颈、宫颈上皮内瘤变和宫颈.docVIP

组织因子途径抑制物―2在正常宫颈、宫颈上皮内瘤变和宫颈 　　[摘 要] 目的：探讨TFPI-2在正常宫颈、宫颈上皮内瘤变和宫颈癌组织中表达。方法：选取2013年1月―2015年12月本院诊治的宫颈癌患者45例、宫颈上皮内瘤变（CIN）患者45例以及正常宫颈组织45例的病理标本，采用免疫组化检测方法，测定3组标本中TFPI-2的表达情况，表达量与宫颈癌分期、分型、淋巴转移的关系。结果：正常宫颈患者、宫颈上皮内瘤变（CIN）患者、宫颈癌患者组织病理标本中TFPI-2的表达逐渐下降，3组间比较差异有统计学意义（P 0.05）。结论：TFPI-2的表达在宫颈癌患者中显著降低，其含量降低可能是导致宫颈癌发生的原因之一。 　　[关键词] TFPI-2；宫颈癌；免疫组化 　　中图分类号：R737.33 文献标识码：B 文章编号：2095-5200（2016）03-079-03 　　DOI：10.11876/mimt201603029 　　宫颈癌是妇科常见的恶性肿瘤，发病可能与HPV感染、分娩次数、初产年龄小以及性生活紊乱等多种因素有关[1]。随着对肿瘤分子水平发病机制的不断研究，参与宫颈癌病理机制的其他因素也在不断被揭示。TFPI-2（组织因子途径抑制物-2）因其最早是从胎盘中分离提取故又称为胎盘蛋白-5[2]，文献报道，TFPI-2与肾癌[3]、肺癌[4]、肝癌[5]等恶性肿瘤的发生发展相关。本研究观察宫颈癌、宫颈上皮内瘤变（CIN）以及正常宫颈的组织病理标本中TFPI-2的表达，探讨TFPI-2是否参与宫颈癌的发生发展。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　选取2013年1月―2015年12月本院诊治的宫颈癌患者45例、宫颈上皮内瘤变（CIN）患者45例以及正常宫颈组织45例的病理标本。宫颈癌患者取材前未行手术或放化疗；健康对照组排除妊娠以及哺乳期妇女。3组患者的年龄、孕产等一般资料相比，差异无统计学意义（P0.05），具有可比性。 　　1.2 检测方法 　　取宫颈组织，甲醛固定、脱水、浸蜡、包埋，，连续切片厚度4μm。切片给予常规脱蜡、水化处理，即：二甲苯3次，20min/次；100%酒精3次，100min/次；之后98%酒精、80%酒精、70%酒精各10min。蒸馏水、PBS液冲洗3次，5min/次；将切片置入枸橼酸缓冲液中进行加热，沸腾后停止加热，5min之后重复加热，之后在室温下进行冷却；用PBS溶液冲洗3次，5min/次；在37℃的温度下，使用3%的H2O2孵育20min，阻断内源性酶的活性；再次用PBS溶液冲洗3次，5min/次；滴加山羊血清封闭15mim，除去多余液体后加入浓度为1：160的TFPI-2抗体，在4℃的温度下孵育过夜；复温并在PBS冲洗后加入生物素标记的二抗IgG工作液，在37℃下孵育15min；用PBS溶液冲洗3次，5min/次；加入辣根标记的链霉卵白素工作液，在37℃下孵育15min；用PBS溶液冲洗3次，5min/次；DAB（联苯胺）显色，在室温条件下显色，显微镜下控制标本的染色程度；在苏木素进行复染约20～30s后使用清水进行冲洗、返蓝；使用梯度酒精进行脱水，即：70%酒精、80%酒精、98%酒精、100%酒精脱水三次，每次5min；二甲苯进行透明，3次，5min/次。结束后使用中性树胶进行封片处理，放于显微镜下进行观察。 　　1.3 结果判读 　　病理科医生在200倍镜下，随机选择5个视野观察，阳性结果为胞质被染为棕黄色。其中不表达是阴性，弱阳性为小于10%、阳性为10%～50%、次强阳性为50%～70%、强阳性为75%～100%。 　　1.4 统计学分析 　　使用SPSS 17.0，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用t检验，计数资料采用率表示，采用χ2检验，等级资料采用秩和检验，以P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 3组患者宫颈组织中TFPI-2的表达情况 　　免疫组化结果显示：正常宫颈患者、宫颈上皮内瘤变（CIN）患者、宫颈癌患者组织病理标本中TFPI-2的表达逐渐下降，3组间比较差异有统计学意义（P0.05）。具体结果见表1。 　　2.2 宫颈癌样本TFPI-2的表达与病理类型、分化程度、分期以及淋巴结转移的关系 　　宫颈癌中TFPI-2的表达与其FIGO分期和淋巴结转移有关，肿瘤越晚期，TFPI-2的表达越低，差异有统计学意义（P0.05）。具体结果见表2。 　　3 讨论 　　3.1 TFPI-2概述 　　TFPI-2是一种丝氨酸蛋白酶家族抑制剂，基因位于染色体7q22，全长7Kb，其编码产物的相对分子质量为32000，广泛分布于人体细胞内[6]。TFPI-2可在内皮细胞、表皮细胞中分泌合成，在胎盘组