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RP―HPLC同时测定三圣汤及其固体汤剂中松脂醇二葡萄糖苷和绿原酸的含量 　　摘要：目的 建立同时测定三圣汤固体汤剂中松脂醇二葡萄糖苷和绿原酸含量的高效液相色谱方法。方法 采用Ultimate XB-C18（250 mm×4.6 mm，5 ?m）色谱柱，以乙腈-0.4%冰醋酸为流动相，梯度洗脱，流速1.0 mL/min，检测波长277 nm，柱温40℃。结果 样品中松脂醇二葡萄糖苷的线性范围为5.0～50.0 ?g，r=0.999 9（n=6）；绿原酸的线性范围为5.4～54.0 ?g，r=0.999 6（n=6）。二者的平均加样回收率分别为98.75%、101.11%，RSD分别为1.39%、2.69%。结论 所建立的方法准确、可靠。三圣汤固体汤剂中松脂醇二葡萄糖苷和绿原酸含量高于三圣汤汤剂。 　　关键词：三圣汤；固体汤剂；高效液相色谱法；松脂醇二葡萄糖苷；绿原酸 　　中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）10-0044-03 　　三圣汤出自清代陈世铎《辨证录》，由杜仲、白术、山萸肉3味药组成。用于治疗肾虚腰痛，补肾中之水火，临床疗效好[1]。固体汤剂是在汤剂改革基础上开发研制的一种新剂型[2]，不仅吸收快、药效迅速、可根据病情变化随证加减、能较全面灵活兼顾不同患者或具体病变阶段的特殊性等，而且可多次冲服、携带方便，提高煎药效率。本研究采用高效液相色谱法（HPLC）测定三圣汤及其固体汤剂中松脂醇二葡萄糖苷和绿原酸含量，以分析二者的差异。 　　1 仪器与试药 　　Waters 2695高效液相色谱仪（Alliance2695四元泵及自动进样系统，2998PAD检测器，Empower2色谱工作站），SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司），RE-2000A旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），KQ-500E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。 　　松脂醇二葡萄糖苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号111537-201103），绿原酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号110753-200413），乙腈为色谱纯（J.T.Baker，German），甲醇为分析纯、醋酸为优级纯（国药集团化学试剂有限公司），水为娃哈哈纯净水，药材饮片购于福州回春中药饮片厂有限公司。 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件 　　色谱柱：Ultimate XB-C18（4.6 mm×250 mm，5 ?m）；检测波长277 nm；流动相：乙腈-0.4%醋酸；梯度洗脱：0～10 min为5%乙腈，10～15 min为15%乙腈，15～40 min为40%乙腈；流速：1.0 mL/min，柱温：40 ℃；进样量：5 ?L。 　　2.2 供试品溶液的制备 　　2.2.1 三圣汤 按处方量比例称取药材饮片约19 g，加自来水煎煮2次，滤过合并滤液，蒸干后加25 mL甲醇超声处理（频率40 kHz，功率500 W）30 min使溶解，滤过，取滤液15 mL甲醇定容至50 mL，过0.45 ?m微孔滤膜，即得。 　　2.2.2 三圣汤固体汤剂 按处方配伍量，称取药材饮片约19 g，按固体汤剂制备方法制备后，冲泡浓缩后加甲醇25 mL超声处理（频率40 kHz，功率500 W）30 min，滤过，取滤液15 mL定容至50 mL，过0.45 ?m微孔滤膜，即得。 　　2.3 对照品溶液的制备 　　精密称取松脂醇二葡萄糖苷和绿原酸对照品适量，加甲醇分别制成0.100、0.108 mg/mL的对照品母液。 　　2.4 线性关系考察 　　分别精密吸取对照品母液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL于10 mL容量瓶中，甲醇定容至刻度。分别吸取5 ?L注入色谱仪，记录色谱图测定峰面积积分值，以对照品的进样质量浓度为横坐标、峰面积为纵坐标进行线性回归。松脂醇二葡萄糖苷的回归方程为Y=2245.2X-1145.7，r=0.999 9（n=6），松脂醇二葡萄糖苷在5.0～50.0 ?g范围内线性关系良好。绿原酸的回归方程为Y=5909.4X-12 844，r=0.999 6（n=6），绿原酸在5.4～54.0 ?g范围内线性关系良好。 　　2.5 精密度试验 　　取三圣汤固体汤剂供试品溶液，连续进样5次，结果绿原酸峰面积RSD=0.09%，松脂醇二葡萄糖苷的峰面积的RSD=0.27%，表明仪器的精密度良好。 　　2.6 稳定性试验 　　取同一批药材制成的固体汤剂供试品溶液，分别于0、2、4、6、12、24 h进行进样，记录HPLC色谱图，结果绿原酸峰面积RSD=0.17%，松脂醇二葡萄糖苷峰面积RSD=0.32%，表明样品在24 h内稳定性良好。 　　2.